Определение в крови. Реактивы: 1) реактивы для осаждения белков по Фолину-Ву (новый метод): 10%-ный раствор вольфрамовокислого натрия и 15 г безводного сернокислого натрия (или 38 г глауберовой соли Na2SO4 · 10 H2O); 2/3 н. раствор серной кислоты; 2) хромовая смесь (двухромовокислый калий + концентрированная серная кислота 20 см3 + дистиллированная вода до 100 см3); 3) 1%-ный раствор крахмала; 4) 0,01 н. раствор йода; 5) 0,02 н. раствор гипосульфита; 6) разведенная серная кислота: в мерную колбу емкостью 500 см3 наливают 300 см воды, приливают 125 см3 концентрированной серной кислоты и по охлаждении доливают водой до метки; 7) 10%-ный раствор NaOH.
Аппарат для перегонки состоит из колбы емкостью около 700 см3, помещенной в жестяной конус для кипячения, холодильника длиной около 60 см и служащей приемником колбы Эрленмейера емкостью в 300 см3. Через пробку перегонной колбы проходит, кроме трубки, соединяющей ее с холодильником, длинный стержень от делительной воронки емкостью в 100 см3. В пробке приемника имеется два отверстия: через первое входит стержень от холодильника, погруженный в жидкость; через второе вставляют короткую трубку, согнутую под прямым углом, для водоструйного насоса.
Ход определения. Осаждение белков по новому методу Фолина: 20 см фильтрата (равно 2 см3 цельной крови) вводят в перегонную колбу, прибавляют 5 см3 серной кислоты при помешивании. В приемник вводят 20 см3 воды, 2 см3 0,01 н. йода и 2 см3 раствора NaOH. Проверяют все соединения аппарата, нагревают колбу на слабом огне. Через аппарат время от времени пропускают осторожно слабую струю воздуха при открытом кране делительной воронки. Время от времени через воронку прибавляют воды в перегонную колбу. Дистилляция длится 25—30 минут. По ее окончании приемник отделяют от аппарата, конец холодильника быстро обмывают водой и оставляют приемник закупоренным в течение 15 минут для окончания реакции образования йодоформа. Этим заканчивается перегонка имеющегося налицо ацетона и ацетона из ацетоуксусной кислоты.
Для определения β-оксимасляной кислоты ее переводят окислением в ацетон, для чего продолжают перегонку уже в новый приемник, в который вводят те же реактивы и в том же количестве, что и в первый приемник. В перегонную колбу во время перегонки (отодвинув горелку) через определенные промежутки времени четыре раза вводят хромовую смесь, всего 10 см3. Перегонка продолжается.. 30 минут, после чего приемник снимают и оставляют его стоять 15 минут.
Титрование. В приемники вводят по 2 см3 и больше серной кислоты для ясно кислой реакции (что видно по пожелтению раствора). Через две минуты добавляют крахмал (раствор синеет) и титруют гипосульфитом до полного обесцвечивания.
Вычисления. 1 см3 0,01 н. раствора йода соответствует 0,1024 мг общего ацетона. Потраченное количество кубических миллиметров раствора умножают на это число и для получения содержания ацетона в 100 см3 крови умножают на 50 (исходя из того, что для перегонки было взято 20 см3 фильтрата, равные 2 см3 цельной крови). Второй приемник титруется также 0,02 н. раствором гипосульфита и из расчета перевода оксимасляной кислоты в ацетон: каждый 1 см3 соответствует 0,25 мг оксимасляной кислоты, т. е. количество кубических сантиметров раствора умножают на 0,25 мг.
Для клинических целей обычно достаточно определить сразу все количество ацетона из всех источников, не выделяя ацетона из β-оксимасляной кислоты. В таком случае можно определить весь ацетон в результате только одной перегонки: к фильтрату крови, приготовленному, как было указано, и перенесенному в перегонную колбу в том же количестве и с теми же добавлениями, сразу, как только начинается кипение, добавляют по каплям хромовосерную кислоту; перегонку продолжают 25 минут. 1 см3 0,01 н. йода соответствуют 0,22 мг ацетоновых тел, выраженных в виде ацетоуксусной кислоты, или 0,25 мг, выраженных в виде β-оксимасляной кислоты.
Необходимо каждый раз ставить слепой опыт. Количество гипосульфита, потраченное при титровании пустого опыта, должно быть только на титрование 2 см3 0,01 н. йода, большая разница указывает на загрязнение аппарата или воздуха.