Определение в моче. Для качественного определения ацетоновых тел в моче пользуются цветной реакцией, которую дает ацетоуксусная кислота и ацетон с нитропруссид-натрием в щелочной среде. Нитропруссид-натрий в 10 раз более чувствителен к ацетоуксусной кислоте, чем к ацетону.
Нитропруссидные реакции не являются специфическими для ацетоновых тел, они происходят и в присутствии некоторых нормальных составных частей мочи (креатинина). Добавление уксусной кислоты разрушает креатининовое окрашивание.
Пробы для открытия ацетоуксусной кислоты и ацетона.
1. Проба Ланге — к 12—15 см3 мочи (3/4 пробирки) прибавляют около 1 см3 ледяной (993/о) или 80%-ной уксусной кислоты и около 0,5 см свежеприготовленного 10%-ного раствора нитропруссидного натрия, после чего осторожно наслаивают 2 см3 концентрированного аммиака. В присутствии ацетоуксусной кислоты в месте соприкосновения жидкостей образуется фиолетовое кольцо; если ацетоуксусной кислоты мало, оно появляется не сразу, при стоянии постепенно исчезает. Ацетон дает ту же реакцию, но гораздо более слабую.
2. Если нет хорошей уксусной кислоты, производят пробу Легаля—приливают несколько капель нитропруссидного натрия и 10 капель 10%-ного раствора едкого натра или калия; появляется красное окрашивание, зависящее также от присутствия креатинина. Приливают 15—20 капель ледяной уксусной кислоты: нормальная моча при этом обесцвечивается, а при наличии ацетоновых тел окраска не исчезает, а только приобретает фиолетовый оттенок. Сходное окрашивание появляется после приема слабительных с алоэ или фенолфталеином.
3. Н. Р. Пясецкий (1960) предлагает следующую модификацию определения ацетона в моче. Реактив — нитропруссид натрия, растертый до состояния пудры, — 1 весовая часть, углекислый натрий — 5 весовых частей и сернокислый аммоний — 5 весовых частей (оба в измельченном виде). Хранится в бутылке из темного стекла с притертой пробкой в тщательно перемешанном состоянии.
На предметное стекло помещается щепотка (около 0,2 г) порошковидного реактива, взятого из бутылки стеклянной лопаточкой (глазной). Чистой пипеткой набирается испытуемая моча и 2—3 капли наносятся поверх реактива (при необходимости может быть исследована на присутствие ацетона слюна больного). Отсутствие фиолетового окрашивания в течение двух минут указывает на отсутствие ацетона. Появление фиолетового цвета в течение этого времени в зависимости от его интенсивности соответствует меньшей или большей концентрации ацетона и может быть обозначено следующим образом: слабое фиолетовое окрашивание — следы; ясный фиолетовый цвет +; темно-фиолетовый цвет + +.
4. Проба Либена (видоизмененная). К 3 см3 мочи прибавляют 1,5 см3 10%-ного раствора едкого натра. Образовавшийся осадок отфильтровывают. К фильтрату прибавляют равное количество приблизительно 0,01 н. раствора йода. В присутствии ацетона спустя 0,5— 0,75 минуты появляется муть. В нормальной же моче образуется лишь легкая опалесценция. Положительная реакция получается в присутствии даже 0,05 г ацетоновых тел в 1 л мочи; при более высокой концентрации моча сразу становится Совершенно мутной. Так как спирт дает помутнение через более продолжительный срок, следует внимательно следить за моментом появления реакции.
Определение ацетона. Для ацетона специфична реакция с пара-нитрофенилгидразином, который образует с альдегидами и кетонами труднорастворимые паранитрофенилгидразины. Для этого над стаканчиком с 4 см3 помещают покровное стекло с нанесенным на него вазелином и каплей фильтрата паранитрофенилгидразина в уксусной кислоте. Стаканчик помещают в сосуд с водой, нагретой до 40°. При помощи лупы наблюдают за образованием кристаллов в капле паранитрофенилгидразина. Если в моче 0,005% ацетона, кристаллы выпадают спустя 20—25 минут, если же 0,1% ацетона, то они появляются в течение первой минуты.
Определение ацетоуксусной кислоты (проба Герхардта). Проба Герхардта основана на цветном соединении, образовавшемся при связывании энольной формы ацетоуксусной кислоты с железом. Наливают полпробирки свежевыделенной мочи и прибавляют по каплям 10%-ный раствор полуторахлористого железа, пока не прекратится образование осадка фосфатов. Фильтруют и к фильтрату прибавляют этот же реактив. В присутствии ацетоуксусной кислоты получается винно-красное окрашивание.
Реакция не специфична, так как появляется после приема салицилатов и фенолов. Для того чтобы отличить ее от медикаментозного окрашивания, пробу производят повторно с кипяченой мочой. Вследствие летучести ацетоуксусной кислоты проба с кипяченой мочой является отрицательной, если окрашивание было вызвано ею. При медикаментозном окрашивании проба остается и с кипяченой мочой.
Определение β-масляной кислоты. β-Масляную кислоту определяют тогда, когда реакция на ацетоуксусную кислоту положительная. Определение производится при помощи нитропруссида натрия после предварительного окисления.
К 20 см3 мочи приливают равное количество воды и несколько капель уксусной кислоты, кипятят, пока количество жидкости не уменьшится наполовину. При этом разрушаются ацетон и ацетоуксусная кислота. Вновь доводят до 20 см3 водой и разливают поровну в две пробирки. К одной из них прибавляют 1 см3 перекиси водорода, осторожно нагревают в течение минуты, дают остыть. В обе пробирки прибавляют по 10 капель ледяной уксусной кислоты и 10 капель свежеприготовленного концентрированного раствора нитро-пруссидного натрия, тщательно смешивают, наслаивают 2,5%-ный аммиак, оставляют стоять 3—4 часа. В присутствии β-оксимасляной кислоты в пробирке с перекисью водорода образуется пурпурное кольцо.