Определение по Иенсену общего количества нейтральных 17-кетостероидов. 10 мл из собранной за сутки мочи наливают в пробирку с 1 мл концентрированной серной кислоты. Пробирку помещают на 30 минут в кипящую паровую баню. После охлаждения мочу трижды экстрагируют этиловым эфиром: в первый раз 10 мл, во второй и третий раз 5 мл. После каждой экстракции мочу отделяют от эфира и вновь наливают в делительную воронку для последующей экстракции со свежей порцией эфира. Мочу отбрасывают и эфирные экстракты смешивают. Эфирный экстракт промывают трижды в делительной воронке каждый раз с 10 мл 10%-ного едкого натра. Затем промывные растворы едкого натра отбрасывают. Эфирный экстракт трижды промывают с 10 мл воды, и промывные воды отбрасывают. 0,5 мл (не менее) безводного сернокислого натрия прибавляют в делительной воронке к эфирному экстракту, который затем переливают в пробирку с пробкой из измельченного стекла. Делительную воронку промывают над пробиркой 2—3 мл эфира.
Содержимое пробирки выпаривают над паровой или водяной баней досуха. Нужно принять меры, чтобы избежать потерь в связи с сильным кипением эфира. Остаток в пробирке растворяют в 0,2 мл абсолютного этанола двойной перегонки, к которому добавляют 0,2 мл 1,2%-ного раствора метадинитробензола в абсолютном этиловом спирте и 0,2 мл свежеприготовленного раствора 20%-ного едкого калия в 95%-ном этиловом спирте. Два последних реагента добавляют в пробирку с 0,2 мл абсолютного этанола и в пробирку с 0,2 мл стандартного раствора (0,5 мл дегидроэпиандростерона на 1 мл абсолютного этанола).
Все пробирки осторожно взбалтывают и оставляют на час в водяной бане при температуре 27° с защитой от прямого света. Ко всем пробиркам добавляют по 10 мл 95%-ного этилового спирта.
Содержимое каждой пробирки переносят на бумагу и последовательно снимают показания по длине волн 520 миллимикрон в «Спектромике 20». Показания стандартного раствора сличают с каждой серией экстрактов, так как они варьируют со дня на день.
Вычисляют количество 17-кетостероидов по следующей формуле:
неизвестные показания/ показания стандарта X суточное количество мочи/100 = количество 17-кетостероидов за сутки, мг.