Сахар крови (определение по Хагедорну и Иенсену). Реактивы. 0,45%-ный раствор сернокислого цинка (заготавливают в запас 45%-ный раствор сернокислого цинка и по мере надобности готовят из него стократное разведение не реже чем раз в 10—14 дней). 0,1 н. раствор едкого натра. Титр может быть не вполне точным, но концентрация его не должна превышать указанную. Смесь этих двух реактивов, приготавливаемая перед употреблением, служит для осаждения белков. Содовощелочной раствор железосинеродистого калия (красной кровяной соли). Раствор готовят из химически чистого препарата, но лучше всего его очистить перекристаллизацией. Кристаллы промывают несколько раз холодной водой и затем растворяют в кипящей воде. Раствор фильтруют в фарфоровую чашку, которую помещают в лед. Избыток воды с выпавших на холоду кристаллов удаляют фильтровальной бумагой, кристаллы помещают для высушивания в сушильный шкаф при 50° или термостат. Очищенный реактив неограниченно стоек. Точно отвешивают на весах 1,65 реактива, помещают в мерную колбу емкостью в 1 л, растворяют в воде, добавляя 10,6 безводного углекислого натрия, и доводят водой до метки. Раствор хранят в темной бутыли на холоду в течение 2 месяцев.
Хлор-цинк-йодистый раствор. Сернокислого цинка 50,0 и хлористого натрия 250,0 растворяют в 1 л воды, если нужно, фильтруют; перед употреблением отвешивают такое количество йодистого калия, чтобы получить 2,5%-ный раствор; например, к 50 мл хлор-цинк-натриевого раствора прибавляют 1,25 йодистого калия.
3%-ная уксусная кислота (3 мл ледяной уксусной кислоты отмеривают в мерную колбу емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки).
1%-ный раствор крахмала (приготовленный заранее насыщенный раствор хлористого натрия наливают в мерную колбу емкостью 100 мл более чем до половины; 1,0 растворимого крахмала растворяют в пробирке в нескольких миллилитрах дистиллированной воды при нагревании, выливают в ту же колбу и доливают тем же раствором хлористого натрия до метки. Раствор неограниченно стоек. С йодом он дает чисто синее окрашивание).
0,02 н. раствор гипосульфита натрия приготовляется перед употреблением из 0,1 н. раствора, отмеривают точно 5 мл в мерную колбу емкостью 100 мл и доливают прокипяченной и охлажденной дистиллированной воды до метки (для изгнания углекислоты). Титр гипосульфита проверяют по титрованному раствору каждый раз при приготовлении нового раствора и повторяют проверку не реже 1 раза в неделю. С этой целью отливают в стаканчик точной пипеткой 2 мл 0,02 и. раствора йодноватистого натрия, прибавляют 2 мл уксусной кислоты, 2 мл хлор-цинк-йодийого раствора и 2—3 капли крахмала и титруют гипосульфитом из микробюретки до исчезновения окраски.
0,02 н. раствор йодноватокислого калия, 0,3567 г которого отвешивают на аналитических весах и растворяют в 2 л дистиллированной воды.
Для фильтрования свернувшейся при кипячении крови повторно кипятят вату в дистиллированной воде, каждый раз сливая и отжимая воду, затем ее просушивают.
Оборудование. Две микропипетки емкостью 100 мм3; пробирки диаметром 15 мм, по две на каждое исследование (всегда делают параллельное исследование); металлический штатив, вместе с которым пробирки помещают в водяную баню; стеклянные воронки диаметром 3—4 см; плоскодонные стаканчики или пробирки диаметром 3—4 см и высотой 10—12 ом, желательно с особым штативом; очень точная пипетка Мора емкостью в 2 мл, с двумя метками; пипетки Мора емкостью в 1 и 5 мл; две градуированные пипетки емкостью 10 мл; несколько мерных колб емкостью 50, 100 или 200 мл; микробюретка емкостью 2 мл с делениями на 0,01 мл.
Ход определения. Устанавливают в штативе пробирки в количестве, вдвое большем по отношению к предполагаемому числу исследований; снабжают их соответствующими номерами (параллельные пробирки помечают одним номером); в каждую пробирку отмеривают по 5 мл 0,45%-ного раствора сернокислого цинка и по 1 мл 0,1 н. едкого натра; образуется хлопьевидный осадок гидрата окиси цинка. Набирают в микропипетку емкостью 0,1 мл кровь из пальца, тщательно вытирают кончик пипетки и выдувают кровь в приготовленную смесь, несколько раз набирают ее в пипетку и вновь выдувают, чтобы смыть всю кровь со стенки пипетки.
Пробирки с кровью могут стоять несколько часов без заметного влияния на результаты анализа. Можно набрать таким образом кровь у всех подлежащих исследованию лиц. Штатив с пробиркой переносят в кипящую водяную баню на 3 минуты. В это время заготавливают штатив со стаканчиками, носящими те же номера, что и пробирки. Снабжают каждый стаканчик воронкой, в которую вложен комок ваты, смоченный дистиллированной водой и слегка утрамбованный стеклянной палочкой. Из каждой пробирки жидкость фильтруют в соответствующий стаканчик, после чего в пробирку наливают 3 мл дистиллированной воды, встряхивают, выливают в ту же воронку, еще раз наливают 3 мл воды и выливают в воронку. Фильтрат должен быть совершенно бесцветным и прозрачным. После того как жидкость профильтровалась до последней капли, воронки снимают и в каждый стаканчик добавляют точной пипеткой ровно 2 мл железосинеродистого раствора, после чего штатив со стаканчиками переносят в кипящую водяную баню на 15 минут. Вода в бане все время кипит. После этого штатив со стаканами переносят в тепловатую, а затем в холодную воду. По охлаждении приливают в каждый стаканчик по 2 мл йод-хлор-цинк-натриевого реактива и уксусной кислоты; прибавляют по 3—4 капли крахмала и титруют раствором гипосульфита до полного обесцвечивания. Отмечают количество гипосульфита, пошедшее на титрование каждой из двух параллельных пробирок.
Ставят также «слепой» опыт, т. е. определяют восстановительное действие реактивов, для чего проделывают все вышеописанное только с реактивами, без крови. При этом на обесцвечивание жидкости должно затратиться 1,98—1,96 мл гипосульфита.
Вычисление. Для каждого исследования берут среднее из 2 определений (если расхождение не слишком велико) и ищут по прилагаемой таблице, какому количеству глюкозы оно соответствует. Если титр гипосульфита не совсем точен, в показания микробюретки вносят поправку, согласно фактору раствора. Из найденной величины вычитают то количество глюкозы, которому соответствует восстанавливающее действие самих реактивов. Полученная разность и соответствует количеству миллиграммов сахара (восстанавливающих веществ) в 100 мл крови.
Определение сахара по Хагедорну — Иенсену
Пример. На титрование пробирки с кровью потрачено 0,93 мл гипосульфита, на титрование параллельной пробирки — 0,96 мл. Средняя величина находится между 0,94 и 0,95. Ищем в первом вертикальном столбце таблицы 0,9 и в верхней строчке числа 4 и 5. На месте их пересечения находим 188 и 186, берем среднее 187. Из этого числа следует вычесть цифру «слепого» опыта; предположим, что па титрование ушло 1,97 и 1,96 мл, что соответствует (по таблице) 006. Из 187 вычитаем 006, получаем 181, что означает искомое количество миллиграммов сахара в 100 мл крови (181 мг%).
В норме сахара в крови натощак 80—120 мг%.