Гельминтологические методы исследования

Гельминтологические методы исследования направлены на выявление яиц (личинок) или фрагментов гельминтов (рис.). Поскольку основная масса гельминтов человека паразитирует в желудочно-кишечном тракте или сообщающихся с ним органах, чаще всего исследуют фекалии больного. Фекалии должны доставляться в лабораторию свежими, в чистой посуде. При необходимости их консервируют добавлением жидкости, содержащей 1900 мл 0,2% водного раствора азотнокислого натрия, 250 мл крепкого раствора Люголя, 300 мл формалина и 75 мл глицерина.

Для обнаружения фрагментов гельминтов фекалии просматривают невооруженным глазом, затем смешивают с водой и исследуют небольшими порциями в чашке Петри на темном фоне. Все подозрительные частицы помещают на предметное стекло в каплю воды и исследуют под лупой. Можно суточную порцию кала поместить в цилиндр с добавлением 5—10-кратного количества воды. После размешивания сосуд оставляют до полного осаждения взвешенных частиц. Поверхностный слой жидкости сливают и наливают чистую воду. Отмытый осадок просматривают небольшими порциями в чашках Петри невооруженным глазом или под лупой. Для обнаружения яиц применяют микроскопические методы исследования.



Метод нативного мазка. Небольшое количество кала из разных мест исследуемой порции растирают на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина, изотонического раствора хлорида натрия или воды. Смесь накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом.

Метод всплывания по Фюллеборну. Одну часть испражнений размешивают в 20 частях насыщенного раствора хлорида натрия (удельный вес 1,18), добавляемого небольшими порциями. Всплывшие на поверхность крупные частицы немедленно удаляют, а смесь оставляют на 45 мин. В течение этого времени яйца гельминтов, имеющие меньший удельный вес, чем раствор хлорида натрия, всплывают на поверхность. Поверхностную пленку снимают проволочной петлей диаметром около 1 см и переносят на предметное стекло для исследования под микроскопом.

Метод Калантарян. Эффективность метода всплывания повышается при замене хлорида натрия насыщенным раствором азотнокислого натрия. В этом случае смесь выдерживают  10—15 мин.

Поверхностную пленку, образующуюся после отстаивания смеси кала с раствором хлорида натрия или азотнокислого натрия, можно снимать и предметным стеклом. С этой целью баночку, налитую до краев смесью испражнений с раствором соли, накрывают предметным стеклом так, чтобы нижняя его поверхность соприкасалась с жидкостью. После отстаивания стекло снимают и, быстро повернув кверху поверхностью, на которой находится пленка, просматривают под микроскопом.

Соскоб сперианальных складок (для выявления яиц остриц и онкосфер бычьего цепня) делают утром до совершения туалета. Деревянным шпателем, смоченным в воде или в 50% растворе глицерина, производят соскабливание вокруг анального отверстия. Полученный материал переносят на предметное  стекло  в  каплю  воды или 50% раствора глицерина и просматривают под микроскопом. Шпатель можно заменить влажным ватным тампоном, которым протирают перианальную область, затем хорошо прополаскивают в воде. Воду центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом.

Метод Берманна (для выявления личинок). Металлическую сетку с нанесенными на нее 5—6 г фекалий укрепляют на стеклянной воронке, вставленной в штатив. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом. Воронку наполняют водой, подогретой до t° 50°, так, чтобы нижняя часть сетки с калом соприкасалась с водой. Личинки активно переходят в воду и скапливаются в нижней части резиновой трубки. Через 4 часа жидкость спускают в центрифужные пробирки, центрифугируют и осадок просматривают под микроскопом.

Метод культивирования личинок анкилостомидна фильтровальной бумаге. Свежие фекалии (0,5 г) намазывают на полоску фильтровальной бумаги размером 15x150 мм так, чтобы края полоски оставались свободными. Полоску помещают в пробирку диаметром 18 мм, содержащую 3 мл воды. Пробирку закрывают пробкой и выдерживают при t° 25° в течение 5—7 дней. За это время развившиеся из яиц личинки спускаются по бумаге на дно пробирки. Их убивают нагреванием и осадок исследуют под микроскопом для дифференциального диагноза. Если точное определение вида паразита не требуется, пробирки просматривают невооруженным глазом.

Анализ мокроты, носовой слизи  и влагалищных выделений для выявления яиц легочной трематоды парагонимуса, личинок аскарид и анкилостомид, яиц остриц, фрагментов эхинококкового пузыря. Исследуемую порцию слизи (выделений) намазывают на стекло и просматривают на черном и белом фоне макроскопически, а затем под микроскопом. Можно добавить к исследуемому материалу 25% раствор антиформина, тщательно взболтать и выдержать 1—1,5 часа в термостате для растворения слизи. Смесь центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом.



Анализ дуоденального и желудочного сока для выявления яиц печеночных трематод, анкилостомид, личинок Strongyloides. Все три порции дуоденального содержимого, полученные при зондировании, центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. Так же исследуют и желудочный сок.

Исследование тканей. Для выявления личинок трихинелл кусочки биопсированной мышцы тщательно расщепляют на волоконца, сдавливают между компрессорными стеклами (толстые стекла с винтами) и исследуют под микроскопом с затененным светом. Для выявления цистицерков мышцы расслаивают препаровальными иглами, выделенный пузырек очищают от окружающей ткани, сдавливают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой.

Анализ крови (для выявления личинок филярий). Исследуют висячую каплю на покровном стекле, окантованном вазелином. Можно 0,3 мл крови смешать с 10-кратным количеством 3% раствора уксусной кислоты. Смесь центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. Для обогащения препаратов к 1 мл венозной крови прибавляют 3 мл 2% раствора формалина или 5-кратное количество жидкости, состоящей из 95 мл 5% раствора формалина, 5 мл уксусной кислоты и 2 мл концентрированного спиртового раствора гематоксилина. Смесь центрифугируют, осадок промывают дистиллированной водой путем центрифугирования и исследуют под микроскопом. Для дифференцирования разных видов филярий исследуют мазки, окрашенные по методу Гимзы — Романовского.

Методы иммунологической диагностики. Применяют серологические реакции (агглютинации, преципитации, связывания комплемента) и аллергические диагностические пробы (см.) с антигенами из соответствующего вида гельминта.

Гельминтологические методы исследования. Рис. Яйца гельминтов. 1—10 — яйца круглых червей (нематод): 1 — 3 — аскариды (1 — оплодотворенное яйцо, 2 — оплодотворенное яйцо без белковой оболочки, 3 — неоплодотворенное яйцо); 4 — аскариды кошачьей; 5 —аскариды плотоядных; 5 —острицы; 7 — власоглава; 8 — томинкса; 9 — анкилостомид; 10 — трихо-стронгилид. 11— 15 — яйца ленточных червей (цестод): 11 — цепня бычьего; 12 — цепня карликового; 13 — цепня крысиного; 14 — цепня тыквовидного; 15 —лентеца широкого. 16 — 24 — яйца сосальщиков (трематод): 16 — трематоды (шистосомы) японской; 17 — трематоды (шистосомы) моче - половой; 18 — трематоды (шистосомы) Мансона; 19 — трематоды (парогонимус) легочной; 20 — трематоды (описторхис) сибирской (кошачьей); 21 — трематоды (клонорхис) китайской; 22 — трематоды (метагонимуса) кишечной; 23 — трематоды (фасциолы) печеночной; 24 — трематоды (дикроцелиум) ланцетовидной.