Для определения в моче гликокортикоидов пользуются последовательным дифференциальным гидролизом их эфирных соединений при помощи кислоты и β-глюкуронидазы. При проведении гидролиза кислотой без использования β-глюкуронидазы производят экстракцию при нейтральном рН, затем немедленно после подкисления до рН 1,0 и повторно при тех же условиях через 24 часа. При помощи бутанола из мочи экстрагируют свободные и связанные кортикостероиды. Получив нейтральную фракцию, можно количественно определять гликокортикоиды или непосредственно или после хроматографического выделения отдельных стероидов.
Определение по восстанавливающим свойствам кортикостероидов (по Толботу или Херду) неспецифично, поэтому чаще пользуются реакциями с фенилгидразином (Портера — Силвера) (норма 4—6 мг); 2,4-динитрофенилгидразином с йодной кислотой, при действии которой образуется формальдегид, определяемый по Коркорану и Пэйджу (норма 0,5—0,8 мг); полярографическим методом, биологическими пробами. Так, при методе Веннинга определяется восстановление гликогена в печени у адреналэктомированных голодающих мышей.
Количественное определение производится сравнением с действием кортизона. Одной гликокортикоидной единицей считается действие 1 у кортизона. Мужчина выделяет в норме около 60 единиц, женщина — около 39 единиц в сутки.
В крови определяют гликокортикоиды при помощи реакции с фенилгидразином (метод Нелсона — Сэмьюэлса). Норма при этом составляет 3+6γ%.