Инсулин (определение в крови). Для количественного определения инсулина в крови пользуются свойствами гормона увеличивать потребление глюкозы изолированной крысиной диафрагмой или жировой тканью придатка яичка крыс. Половины диафрагмы голодавших в течение суток крыс помещают в сосуды с солевым буферным раствором, причем в один из сосудов вводят испытываемую сыворотку. Затем в сосуд добавляют глюкозу до концентрации ее в 200 мг%-ном растворе, помещают сосуды в термостат при температуре 37° и через 90 минут охлаждают их. О действии инсулина судят по разнице в содержании глюкозы в каждом сосуде до и после опыта, рассчитанном на 100 мг влажного веса диафрагмы.
Кровь больных сахарным диабетом в состоянии комы не усиливает потребления глюкозы, в норме инсулина в сыворотке 6,25·10—5—6,25·10—4 ЕД в 1 мл (по Грену), при сахарном диабете оно ниже 10—5 ЕД в 1 мл, а при инсуломе более 10—3 ЕД в 1 мл.
При строго контролируемых условиях опыта методика отличается высокой чувствительностью и дает возможность выявить даже малые количества инсулина в плазме (10—5 ЕД в 1 мл).
Имеются указания о том, что малые дозы инсулина влияют на процесс поглощения глюкозы фибробластами курицы и перфузируемым сердцем крысы (Дж. Валланс-Оуэн). Это дает возможность использовать указанные системы для определения инсулина в плазме крови.
Удовлетворительные результаты определения содержания инсулина получают и при изучении гипогликемизирующего влияния испытуемой плазмы крови на содержание сахара в крови животных. Целесообразно ранее позаботиться при этом о повышении чувствительности этих животных к малым дозам инсулина, что связано с известными техническими трудностями. Обычно для определения содержания инсулина используют одну из следующих методик.
1. Крысам производят гипофизэктомию, удаляют у них мозговую часть надпочечников и вызывают затем аллоксановый диабет. В последующем животным дают легкий нембуталовый наркоз и вводят внутривенно инсулин или исследуемое на инсулин вещество. Сопоставляя величины изменения гликемии до и после введения инсулина и исследуемой крови, получают представление о ее инсулиновой активности.
2. Крысам или мышам производят гипофизэктомию и вызывают затем аллоксановый диабет. После установления стабильного уровня гликемии через желудочный зонд вводят 300 мг глюкозы, а через 20 минут вводят внутрибрюшинно исследуемую кровь. До введения глюкозы и на протяжении часа после ее введения контролируют уровень гликемии. По снижению гликемии судят об инсулиновой активности крови.
3. Несколько лучшие результаты дает определение инсулиновой активности исследуемой плазмы крови на гипофизэктомированных, адреналэктомированных крысах с аллоксановым диабетом. Исследуемую плазму вводят животным подкожно. До введения плазмы и на протяжении часа после ее введения определяют гликемию. Установлено, что существует линейная зависимость между логарифмом дозы инсулина и снижением гликемии. При всех исследованиях целесообразно предпослать опыту контрольное изучение гликемии под влиянием введения тем же животным физиологического раствора.
Постановка исследования допустима только на тех животных, у которых под влиянием физиологического раствора не обнаруживаются существенные изменения в уровне гликемии.
Определение инсулина производится также при помощи радио-хроматографического анализа. При введении здоровым или больным диабетом людям или животным инсулина, меченного радиоактивным йодом (J131), на хроматограмме или электрофореграмме можно обнаружить радиоактивность инсулина. При этом оказывается возможным определять количество как свободного, так и связанного белками инсулина.