Полученные при биологических исследованиях табачных «смол» результаты побудили к проведению более детального и систематического тестирования на коже мышей разных фракций и субфракций твердой фазы табачного дыма (рис. 35) [Hoffmann, Wynder, 1971]. Обнаружившими значительную активность в качестве четко выраженных канцерогенов были только нейтральная фракция и ее субфракции В и В1. Продукт дальнейшего разделения на более мелкие составляющие субфракций В1, составивший 0,6% от всей массы твердой фазы, привел к получению высоко канцерогенного концентрата Blh (0,09% от всей массы «смолы»), а этот концентрат был в свою очередь хроматографически разделен на 80 конечных фракций. При тестировании их в качестве факторов, вызывающих возникновение опухолей на коже мышей (рис. 36), было установлено, что конечные фракции Blh 56—66 и Blh 71—78 высокоактивны. Химический анализ выявил, что они состоят главным образом из полициклических ароматических углеводородов, многие из которых являются известными канцерогенами у лабораторных животных (табл. 58, 59) [Hoffmann, Wynder, 1971]. Аппликация на кожу мышей этих высокоактивных конечных фракций в дозах, пропорциональных их концентрации в твердой фазе табачного дыма, не приводила к возникновению опухолей. Однако одновременное нанесение на кожу мышей активных нейтральных субфракций и неактивной фенольной фракции твердой фазы табачного дыма вызывало развитие опухолей в 65—75% от общего числа таких случаев, индуцируемых всей массой смолы. Это указывает на то, что фенольная фракция обладает коканцерогенным действием, а в дальнейших исследованиях обнаружено, что основными коканцерогенами в этой части фракции являются катехины [Hecht et al., 1981]. Сам по себе катехин содержится в: табачном дыме в наибольших из всех фенолов количествах: 26—360 мкг на одну сигарету [Wynder, Hoffmann, 1967; Brunnemann et ail., 1976Ь]. В табл. 60 приведены основные эпителиальные канцерогены и коканцерогены, выявленные в дыме сигареты без фильтра.
Рис. 35. Фракционирование сигаретной смолы. К — относительная канцерогенная активность; П — относительная активность промоции.
Рис. 36. Степени инициирующей активности 80 конечных фракций субфракции BI.
Таблица 58. Основные соединения, выявленные в нейтральных субфракциях B1h 56—66 твердой фазы табачного дыма
| Хлорированные углеводородистые инсектициды | Бензофторены |
| ДДД | 11Н-бензо[a]фторен |
| 11 Н-бензо[b]фторен | |
| o, p'-ДДД | 7Н-бензо[c]фторен |
| ДДТ | 17Н-циклопента[а]фенантрен |
| o, p'-ДДТ | 17Н-циклопента[а]фенантрен |
| ДДМ [ДДД—HCl] | х-метил-17Н-циклопента[а] |
| ДДЕ [ДДТ-HCl] | фенантрен |
| Транс-4,4' -дихлорстильбен | х-этил-17Н-циклопента[а] |
| N-алкилкарбазолы | фенантрен |
| 9-Метилкарбазол | х-фенилинден |
| 9-Этилкарбазол | Пирены |
| 1,9-2, 9-3,9 и 4,9-Демитилкарбазол | Пирен |
| Фторантены | 1-, 3- и 4-Метилпирен |
| Фторантен | х, х'-диметилпирен(ы) |
| 1-, 2-, 3-, 7- и 8-Метилфторантен | |
| х'-этилфторантен (ы) | |
| х, х'-диметилфторантены | |
| Бензо[mno]фторантен |
Таблица 59. Основные соединения, выявленные в нейтральных субфракциях B1h 71—78 твердой фазы сигаретного дыма
| Хризены | Бензофторантены |
| Хризен | Бензо[b]фторантен |
| 1-, 2-, 3-, 4-, 5- и 6-Метилхризен | Бензо[j]фторантен |
| х, х'-диметилхризен(ы) | Бензо[k]фторантен |
| х-этилхризен (ы) | Идено[1, 2, 3-сd]пирен |
| Бенз[а]антрацены | Дибензопирены |
| Бенз(а]антрацен | Дибензо[а, hЬ]пирен (?) |
| х-метил бенз[а]антрацен | Антантрен |
| Бензо[с]фенантрены | Перилен |
| Бензо[с]фенантрен | Бензо[ghi]перилен |
| х-метилбензо{с]фенантрен | |
| Бензопирены | |
| Бензо[а]пирен | |
| х-метилбензо[а]пирены | |
| Бензо[е]пирен |
Таблица 60. Канцерогены и коканцерогены в дыме сигареты без фильтра
| Вещество | Относительная канцерогенная активность | Содержание в одной сигарете, нг |
| Канцерогены | ||
| Бензо[а]пирен | + + + | 10—50 |
| 5-Метилхризен | + + + | 0,6 |
| Дибенз[а, h]антрацен | + + | 40 |
| Бензо[b]фторантен | + + | 30 |
| Бензо[]]фторантен | + + | 60 |
| Дибензо[а, i]пирен | + + | присутствует |
| Индено[1, 2, 3-cd]пирен | + | 4 |
| Бенз[а]антрацен | + | 40—70 |
| Хризен | + | 40—60 |
| Бензо[е]пирен | ? | 5—40 |
| Дибенз[а, j]акридин | + + | 3—10 |
| Дибенз[а, h]акридин | + | 0,1 |
| Дибензо(с, g]кapбaзoл | + | 0,7 |
| Коканцерогены | ||
| Пирен | 50-200 | |
| Фторантен | 100—260 | |
| Бензо[ghi]перилен | 60 | |
| 4,4'-Дихлоростильбен | 1500 | |
| Катехин | 2500—360 000 | |
| З-Метилкатехин | 11 000—20000 | |
| 4-Метилкатехин | 15 000—21 000 | |
| 4-Этилкатехин | 10 000—24 000 | |
Каждая конечная фракция была тестирована на коже 90 мышей; группа отрицательного контроля не получала аппликации опухолеобразующего вещества (1% кротоновое масло). Линия а — фракции, обладающие активностью, значительно превышающей активность в группе отрицательного контроля (р<0,05); линия b — фракции, обладающие сильной инициирующей активностью, превышающей активность фракций, характеризующихся линией а.