Левинталя среды

Левинталя среды (W. Levinthal)— специальные среды (агар, бульон, кровяной агар) для культивирования бактерий, плохо растущих на обычных питательных средах.

Предварительно готовят мясную кашицу — 100 г мяса, пропущенного через мясорубку, заливают 300 мл стерильной дистиллированной воды. Смесь переносят в бутыль, добавляют 10 мл нормального раствора соды, тщательно перемешивают и ставят в термостат на 1—2 часа при 37— 60°. Прибавляют 0,5 г панкреатина в 20— 30 мл воды с 2 мл нормального раствора соды и 10 мл хлороформа; бутыль завязывают пергаментной бумагой и оставляют стоять сутки при 37°, часто встряхивая. Для предварительного определения рН в колбочке смешивают 20 мл тщательно взболтанной мясной кашицы и 20 мл буферного раствора, кипятят 1 мин. на огне и горячим фильтруют через бумажный фильтр; затем охлаждают и определяют рН (должен быть 6,9—7,2).

Для приготовления агара буферный раствор 8 : 1000 двухосновного фосфорнокислого натрия (Na2HPO4) в дистиллированной воде, подкисленной соляной кислотой до рН=5,6—6,6, стерилизуют в аппарате Коха. На растворе готовят 3% агар и смешивают в кастрюле с равным объемом мясной кашицы. Смесь нагревают на сильном огне и кипятят 1 мин. Агар декантируют в колбе и повторно дают вскипеть; горячим фильтруют через бумажный фильтр (первую порцию дважды) и подщелачивают нормальным раствором соды до рН=7,5— 7,8; повторно кипятят (лучше небольшими порциями — по 250 мл). Разливают в стерильные пробирки и затем стерилизуют в аппарате Коха по 10—15 мин. 3 дня подряд.

Агар применяют для культивирования менингококка, гонококка, палочки Пфейфера и др.

Для приготовления бульона мясную кашицу и буферный раствор смешивают в равных количествах, кипятят, фильтруют, исправляют реакцию, вновь кипятят, разливают в пробирки или колбы, стерилизуют в аппарате Коха; пептон и соль не прибавляют.

Для приготовления кровяного агара 2% питательный агар (рН = 7,3—7,5) растапливают в колбе и охлаждают до 60°, медленно, постоянно встряхивая, стерильно добавляют 5—10% дефибринированной крови (лошадиной, кроличьей или человеческой), прогревают в аппарате Коха при 100°. Продолжительность прогревания 1л — 5 мин., 2 л — 8—10 мин. Перегрев агара недопустим: кровь выпадает в осадок и среда становится непригодной. Прогревание среды можно производить и на водяной бане: прогреть 2— 3 мин., вынуть, взболтать и вновь прогреть (всего 2—3 раза). Среды осаждают в течение 2 час. при 60° и верхний прозрачный слой разливают в чашки. Чтобы среда получилась прозрачной, ее фильтруют через тонкий слой необезжиренной перевязочной ваты. Среду хранят не более 3 недель.

Применяют среду для выращивания палочки инфлюэнцы.

См. также Дифференциально-диагностические среды, Питательные среды.