Бактериологическая техника — совокупность методов и приемов, применяющихся при бактериологическом исследовании. Бактериологическая техника включает методы обнаружения, культивирования и выделения бактерий из исследуемого материала с последующей их идентификацией.
Основные методы бактериологического исследования. Одним из распространенных приемов бактериологической техники является приготовление препаратов для микроскопии (см.). На обезжиренном стекле равномерно распределяют каплю суспензии, содержащую исследуемый материал. Плотный материал наносят на предметное стекло, покрывают вторым стеклом (рис. 1), затем стекла раздвигают в стороны, получая два мазка; жидкие объекты (кровь и т. п.) наносят по средней линии стекла, шлифованное стекло подводят к капле под углом (рис. 2) и, после того как капля растечется, двигают справа налево. Мазок высушивают при комнатной температуре или в термостате, после чего фиксируют к поверхности стекла в пламени горелки; для этого стекло мазком вверх троекратно проводят через пламя. При изучении деталей структуры бактерий, мазков крови, отпечатков органов используют фиксирующие жидкости (спирты, смесь Никифорова, жидкость Карнуа и др.).
Для окраски служат следующие красители: красные — фуксин основной, фуксин кислый, сафранин, нейтральный красный, конго красный; синие — метиленовый синий, толуидиновый синий, опаловый синий; фиолетовые — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый. Простые методы окраски бактерий — окраска водным раствором метиленового синего, щелочным синим по Леффлеру и фуксином Пфейфера. Сложные методы окраски: по Граму, Цилю — Нельсену, Романовскому— Гимзе, Нейссеру и др.,— применяются для дифференциации бактерий; для изучения структуры бактериальной клетки — Бениньетти метод (см.), Гипса метод (см.), Леффлера метод и др. После окраски препарат промывают водой и подсушивают.
Основные элементы бактериологической техники — посевы и пересевы бактериальных культур. Пробирки с культурой и незасеянной средой берут в левую руку; в правую руку берут бактериальную петлю и прокаливают в пламени горелки. Затем пробки из пробирок вынимают, захватывая их мизинцем правой руки. Обжигают края открытых пробирок, вводят простерилизованную петлю в пробирку с культурой, остужают петлю о стенки пробирки и прикасаются ею к поверхности бактериального роста, легким движением набирают культуру, быстро переносят петлю в незасеянную пробирку и производят засев (рис. 3). Над пламенем закрывают пробирки пробками и стерилизуют петлю прокаливанием. При посеве в жидкие питательные среды пользуются пастеровской пипеткой. Иногда производят посев уколом в толщу среды, прокалывая бактериальной петлей или специальной иглой питательную среду до дна (рис. 4).
Выделение чистых культур. Для исследования и практических целей необходимо работать с чистой бактериальной культурой (см.). Существуют методы выделения чистых культур биологические и основанные на механическом принципе разделения микробов. Метод рассева по поверхности плотной среды: каплю исследуемого раствора наносят на твердую питательную среду в чашках Петри, крышки которых слегка приоткрывают (рис. 5); затем каплю втирают шпателем; оставшийся на нем материал переносят последовательно во вторую и третью чашки. Засеянные чашки ставят в термостат.
При необходимости подсчета количества бактерий в испытуемом материале применяют методы рассева в глубине слоя. Делают три последовательных разведения материала в пробирках с определенным объемом расплавленного и остуженного агара, который затем выливают в чашку Петри (рис. 6). При большой концентрации бактерий в исходном материале его предварительно разводят в физиологическом растворе. На каждой последующей чашке количество бактериальных колоний уменьшается соответственно разведению (рис. 7). Подсчет колоний производят в камере Вольфгюгеля.
Биологические методы выделения чистых культур основаны на учете свойств выделяемого микроба: 1) выделение чистой культуры подвижных бактерий по методу Шукевича: испытуемый материал засевают петлей в конденсационную воду косого агара, не касаясь поверхности среды; подвижные бактерии растут не только в конденсационной воде, но и на поверхности агара; 2) выделение чистой культуры путем использования различной чувствительности бактерий к низким и высоким температурам. Этим способом пользуются для выделения чистой культуры спорообразующих бактерий. Для выделения чистых культур некоторых бактерий можно воспользоваться организмом животного, чувствительного к данной инфекции.
Выращивание бактерий. Все бактерии по их отношению к температуре подразделяются на три основные группы: психрофильные (температурный оптимум роста 5—20°), мезофильные (большинство патогенных бактерий; оптимальная температура 34—37°) и термофильные (температурный оптимум роста 65—70°). Продолжительность выращивания зависит от вида бактерий и варьирует от 24 час. до 2—3 недель. Для создания требуемых температурных условий применяют термостаты. Глубинное выращивание бактерий — см. Аэрация в микробиологии; культивирование анаэробов — см. Анаэробы.
См. также Бактериологическое исследование.
Рис. 1. Приготовление мазка мокроты.
Рис. 2. Приготовление мазка крови.
Рис. 3. Техника посева бактерий на скошенный агар.
Рис. 4. Техника посева уколом.
Рис. 5. Посев на чашку Петри.
Рис. 6. Розлив агара с культурой при выращивании в глубине среды.
Рис. 7. Рост бактерий на чашках Петри при последовательном посеве.