Страницы: 1 2 3 4

Определение групповой принадлежности крови

Выявление антигенов системы АВ0(Н) производится тремя основными методами: количественный метод абсорбции агглютининов прост, позволяет избежать влияния различных загрязнений предмета-носителя, но недостаточно чувствителен; серологические методы абсорбции-элюции и смешанной агглютинации весьма чувствительны и в основном применяются для установления групповой принадлежности крови в следах малого размера. Эти методы основаны на способности антител α и β абсорбироваться соответствующими антигенами А и В. В качестве недостатка методов абсорбции-элюции и смешанной агглютинации следует отметить необходимость использования при них диагностических сывороток высокой активности, а также тщательного соблюдения всех этапов исследования во избежание появления неспецифических реакций, могущих привести к экспертным ошибкам.

При использовании метода абсорбции в количественной модификации материал пятна приводят во взаимодействие с сыворотками α и β, взятыми в заранее подобранном титре. При наличии в пятнах антигена соответствующие антитела сыворотки соединяются с ним и сыворотка либо теряет способность реагировать с соответствующими эритроцитами (например, сыворотка а не агглютинирует эритроциты группы А), либо значительно понизит свой титр. После абсорбции определяют титр сывороток и на основании изменения титра судят о присутствии того или другого антитела или их обоих в пятне крови. Метод требует сравнительно большого количества исследуемой крови.

Реакции абсорбции-элюции и смешанной агглютинации позволяют последовательно в одном и том же материале исследовать антигены нескольких эритроцитарных систем. На первом этапе они проводятся одинаково. Берут две ниточки длиной по 0,5— 0,6 см и обрабатывают их метиловым спиртом для фиксирования крови на материале исследования. Одну ниточку заливают сывороткой α, а вторую — сывороткой β (рис. 95).

схема реакции абсорбции-элюции
Рис. 95. Схема реакции абсорбции-элюции.

При присутствии в исследуемом материале соответствующего сыворотке антигена (например, α и А) происходит абсорбция этого антитела и образуется комплекс антиген — антитело. Этот комплекс при последующем отмывании ниточек от свободных антител не удаляется. Если затем производят реакцию абсорбции-элюции, то элюцию (разъединение комплекса антиген — антитело) производят путем нагревания в изотоническом растворе хлорида натрия. Антитела при этом поступают в окружающую среду. Путем добавления к элюату эритроцитов группы А и В выявляют элюированное антитело   (агглютинация   соответствующих  эритроцитов).   На основании этого судят о присутствии в исследуемой крови антигенов. Например, исследуемая кровь содержит антиген А. В этом случае сыворотка а свяжется с антигеном А и при элюции выйдет в элюат. Присутствие антител а в элюате будет установлено, так как они вызовут агглютинацию стандартных эритроцитов А.

При проведении реакции смешанной агглютинации к ниточкам после промывания добавляют стандартные эритроциты группы А и В (к ниточке, обработанной сывороткой а, добавляют эритроциты группы А, а к ниточке, обработанной сывороткой 6, — эритроциты группы В).

При наличии в пятне крови антигена А сыворотка вступит в связь с этим антигеном и после добавления эритроцитов группы А свободные валентности антител а фиксируют эритроциты А. Аналогичная картина будет наблюдаться с эритроцитами В при наличии в пятнах крови антигена В. При микроскопировании наблюдаются скопления эритроцитов в виде бус или муфт вдоль волокон исследуемой ниточки. При отрицательном результате исследования эритроциты распределяются в препарате равномерно.

Система MNSs   имеет девять групп: MNSs, MNs, Ns, Mss, Ms, MS, NSs, MNS и Ns. Вследствие благоприятной частоты распределения среди населения система является весьма информативной для судебно-медицинской групповой индентификации. Установление групповых факторов системы MNSs в пятнах крови сложно в связи с меньшей устойчивостью и сохраняемостью антигенов М, N, S, s в пятнах крови по сравнению с групповыми антигенами системы АВ0(Н), а также с различной антигенной силой выраженности ее групповых факторов М и N. В настоящее время для выявления антигенов системы MNSs в следах крови довольно успешно применяются методы абсорбции-элюции и смешанной агглютинации с использованием высокоактивных диагностических сывороток.