Не всегда, однако, удается обнаружить трихомонады и в окрашенных препаратах, особенно из уретральных выделений у мужчин. Иногда при микроскопическом исследовании выявляются безжгутиковые, неподвижные, круглой формы образования, сходные с трихомонадами. Б. Ф. Печерский (1958) указывает, что подобных образований встречается до 30%. и их трудно отличить от трихомонад. В таких подозрительных случаях и у больных с подозрением на трихомоноз при необнаружении паразита микроскопическим путем проводят культуральное исследование патологического материала.
Культуральный метод диагностики трихомоноза в последнее время приобрел много сторонников. Его рекомендуют Т. Г. Горбовская (1955), Б. А. Теохаров, М. В. Левинштейн и Д. Г. Розен (1959) и др. Некоторые же авторы (Б. П. Метальников, Т. А. Кислова, 3. А. Лесина, 1959) считают, что при исследовании уретральных выделений у мужчин на трихомонады культуральная диагностика не имеет преимуществ перед микроскопическим исследованием. Такого же мнения придерживается М. Л. Киселева (1956) и др.
Питательные среды для выращивания в лабораторных условиях трихомонад, предложенные разными авторами в различных модификациях, широко используются при изучении биологических свойств и особенностей паразита, а также в диагностике трихомоноза. Размножение влагалищных трихомонад в искусственных условиях зависит от целого ряда факторов: температуры, реакции среды, достаточного питания, стерильности среды до и после ее засева.
Из многочисленных питательных сред наиболее популярными являются две среды: Павловой и Джонсона—Трассела, применяемые в различных модификациях. Среда Павловой не является элективной. На ней вырастает и сопутствующая флора. Среда Павловой содержит физиологический раствор, лошадиную сыворотку, буферный раствор фосфорнокислых солей (0,6354 г однометаллического фосфорнокислого калия и 0,3564 г двуметаллического фосфорнокислого натрия) и рисовый крахмал. Среда Джонсона—Трассела была усовершенствована в 1943 году Johnson и в литературу вошла как среда СР1М. Состав ее следующий: 20% печеночного настоя, 20% сыворотки крови человека, 2% пептона, 0,1% агара, 0,1% мальтозы, 0,15% солянокислого цистеина, 60% раствора Рингера (NaCl 6,5 г., КCl 0,14 г, СаCl2 0,12 г, NaHCO3 0,2 г и до 1 л дистиллированной воды) и 0,002% метиленовой сини. Наилучшие условия роста в такой питательной среде создаются при рН 6—7,5 и температуре 37—39°.
Чистую культуру трихомонад на модифицированной питательной среде Джонсона—Трассела получали Ю. X. Терас (1954), Б. А. Теохаров, Г. М. Пароникян (1954), С. А. Паевский (1957) и др. Авторы, работавшие с оригинальной средой Джонсона—Трассела, а также с ее модификациями, единодушно отмечают превосходство культуральной диагностики над диагностикой микроскопической даже в случаях, когда производится параллельный просмотр окрашенных и нативных препаратов.
Б. А. Теохаров (1959) предложил для культуральной диагностики трихомоноза у женщин упрощенную питательную среду, состоящую из печеночного настоя (20%), кровяной сыворотки или асцитической жидкости (20%), глюкозы (0,05%), физиологического раствора (59,6%) с добавлением пенициллина и стрептомицина по 50 ЕД на 1 мл среды. Пользуясь упрощенной средой для культуральной диагностики, автор смог повысить частоту выявления трихомонад на 16,6%.
Ю. X. Терас (1954) рекомендует для культуральной диагностики трихомоноза питательную среду, в состав которой входит печеночный бульон (20 мл), раствор Рингера (600 мл), затем последовательно добавляют пептон (20 г), агар — агар (1 г) и солянокислый цистеин (1,5 г). Смесь стерилизуется при 120° в течение 20 мин. После фильтрования в горячем виде через фильтровальную бумагу добавляют к фильтрату мальтозу (5 г), после чего среду стерилизуют при 105° в течение 20 мин. К охлажденной среде добавляют 200 мл стерильной инактивированной сыворотки человеческой крови. Реакцию среды доводят до рН 6,0—6,3 и разливают в стерильные пробирки. Для получения чистых культур добавляют к 1 мл среды по 2500 ЕД пенициллина и стрептомицина. После 48—72-часового выращивания при температуре 37° культуру пересевают на такую же питательную среду с добавлением такого же количества пенициллина и стрептомицина (пенициллин и стрептомицин растворяют в растворе Рингера с рН 6,0—6,3). После 48—72-часового выращивания культуры при температуре 37° производится еще раз пересев на такую же питательную среду, но без добавления антибиотиков.