Определение гонадотропных гормонов в моче позволяет изучить гонадотропную функцию гипофиза. Метод определения гонадотропных гормонов в моче Г. С. Степанова основан на адсорбции их на молекулярном адсорбенте — каолине из мочи в кислой среде, элюции из каолина щелочью и осаждении пятикратным объемом холодного ацетона.
В качестве детоксической процедуры предложено троекратное промывание осадка чистым ацетоном с последующим троекратным промыванием эфиром для наркоза. Суточную мочу собирают без консерванта, хранят в холодильнике. Длительное хранение нежелательно. Из суточного количества мочи 1 л доводят концентрированной уксусной кислотой до рН 4 (если суточный диурез был меньше 1 л, доливают дистиллированной водой до 1 л). К подкисленной моче добавляют 50 мл 20%-ного раствора водной суспензии каолина и смесь встряхивают в течение часа на встряхивающем аппарате. Каолин с адсорбированным на нем гонадотропным гормоном собирают в центрифужную пробирку емкостью 500 мл центрифугированием в течение 10 минут при 2500—3000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость, содержащую водорастворимые токсические вещества и неорганические соли, отбрасывают.
В центрифужную пробирку к каолиновому осадку приливают 70 мл 0,1 н. раствора едкого натра, осадок тщательно растирают до получения гомогенной суспензии. Проверяют рН, и, если необходимо, его доводят уксусной кислотой до 10 л. Суспензию центрифугируют в течение 15 минут при 2500—3000 оборотов в минуту. После центрифугирования надосадочную жидкость (щелочной экстракт) сливают в цилиндр с пробкой емкостью 500 мл, содержащий 350 мл охлажденного ацетона. Цилиндр ставят в рефрижератор на 18— 20 часов для полного осаждения гонадотропинов, которые выпадают в виде светло-коричневых хлопьев. Через 18—20 часов прозрачный надосадочный слой ацетона сливают. Остаток ацетона с осадком переносят в центрифужную пробирку емкостью 25—50 мл и центрифугируют в течение 10 минут при 3000 оборотов в минуту.
В качестве детоксической процедуры применяют троекратное промывание каолин-ацетонового осадка 20—25 мл чистого ацетона и трижды 20 мл эфира для наркоза. После промывки эфиром осадок высушивают на водяной бане при 30—40° для удаления следов эфира. Такой высушенный экстракт может храниться в холодильнике 12 месяцев и более (храниться в тех же пробирках, в которых производилось промывание). Высушенный осадок представляет собой светло-коричневый порошок весом в 450—950 мг.
В центрифужную пробирку с осадком приливают физиологический раствор (12 мл при исследовании мочи, в которой предполагается высокое содержание гонадотропных гормонов, и 7 мл при исследовании мочи с низким содержанием гонадотропных гормонов). Осадок тщательно растирают до получения гомогенного раствора и для полноты экстракции физиологическим раствором оставляют на 20 минут при 20—25°. Затем центрифугируют в течение 20 минут при 2500 оборотов в минуту. Полученный прозрачный светло-коричневый или соломенно-желтый раствор готов для введения животным. Это так называемый основной раствор.
Гонадотропный экстракт вводится под кожу один раз в день в течение трех дней неполовозрелым самкам белых мышей в возрасте 20—22 дней, весом в 7—9 г. Через 72 часа после первой инъекции животных обезглавливают. Иссекают матку и яичники, освобождают от жидкости рассечением, высушивают фильтровальной бумагой и быстро взвешивают на торзионных весах. Для контроля применяют вес матки интактных животных (5,6—7,8 мг). Каждый «основной» экстракт определяют в 2—4 разведениях.
Вес матки под влиянием гонадотропного гормона увеличивается в 7—9 раз. Результаты исследований определяются в мышино-маточных единицах (ММЕ). 1 ММЕ равна такому количеству гонадотропного гормона, которое способно увеличить вес матки неполовозрелой самки белых мышей па 100% против контроля.
У женщин с нормальным менструально-овариальным циклом суточное выделение гонадотропных гормонов колеблется от 7 до 174 ММЕ, при менопаузе — 274±11,5 ММЕ.