Показатель повреждения нейтрофилов (ППИ) по В. А. Фрадкину (1962)

Проводится с бактериальными аллергенами, иногда с лекарственными, бытовыми, пыльцевыми.

Реактивы и оборудование: спирт 96°, 40% раствор формалина иейтралный, гематоксилин, йодная кислота (750 мг йодной кислоты растворить в 150 мл дистиллированной воды), реактив Шиффа (1 г основного фуксина растворить в 200 мл горячей воды, кипятить 5 минут; добавить 20 мл соляной кислоты и 1 г метабисульфита, профильтровать), 0,1% метиловый зеленый. Аллергены используются в разведении с 25% раствором цитрата натрия 4:1. Для диагностики используются бактериальные аллергены производства Казанского НИИЭМ с этикеткой на ампулах «Для постановки теста «ППН», термостат, стерильная посуда (пробирки, пипетки), микроскоп.

Техника. Для каждого исследования используются две химически чистых и стерильных пробирки — опытная и контрольная. Если одномоментно проводится исследование с несколькими аллергенами, для каждого из них берут отдельную пробирку, а контрольная остается общей. Аллергены в смеси с раствором цитрата натрия вносят по 0,02 мл в опытные пробирки, а в контрольную пробирку — 0,02 мл 5% стерильного раствора цитрата натрия В каждую опытную и контрольную пробирки добавляется с помощью микропипетки по 0,08 мл крови, взятой из пальца больного. Нерезкими покачиваниями кровь перемешивают с антикоагулянтом, пробирки закрывают мягкими пробками и помещают на 2 часа в термостат при 38° С. Затем готовят мазки на обезжиренных предметных стеклах, их маркируют и после подсушки на воздухе фиксируют в течение 10—15 минут смесью 96° спирта и 40% раствора формалина (10: 1). После фиксации мазки отмывают в трех порциях 96° спирта по 10 минут в каждой и после просушки окрашивают йодной кислотой (в темном стакане 8 минут), промывают в 3-х порциях дистиллированной воды по 3 минуты в каждой, сушат на фильтровальной бумаге, обрабатывают реактивом Шиффа 18 минут, затем в 2-х стаканах сернистой воды по 2 минуты, опускают в сосуд с проточной водопроводной водой на 30 минут. Затем помещают в стакан с краской (0,1% метиловый зеленый) на 1—2 минуты и прополаскивают в стакане с дистиллированной водой. Вытирают марлей со стороны стекла, сушат на фильтровальной бумаге.

Оценка результатов. Под иммерсионной системой микроскопа в каждом мазке (опытных и контрольном) сосчитывается по 100 нейтрофилов, учитываются поврежденные, разрушенные, имеющие амебоидную активность клетки. Результат выражают индексом, который находят по формуле
         ,
 где Но — число поврежденных клеток в опытном мазке, Нк — аналогичное число в контрольном препарате, 100— количество сочетанных лейкоцитов в каждом мазке. Тест считается положительным, если значение ППН превышает 0,1.