После работ Иннерфилда и других исследователей возник значительный интерес к лечебному действию ферментов при воспалительных заболеваниях. В связи с этим весьма актуальным стал вопрос о всасывании их при пероральном, парэнтеральном и местном применении, что нашло отражение в многочисленных публикациях.
Факт всасывания ферментов, вводимых парэнтерально, достоверно установлен, и этот вопрос не требует дальнейшего обсуждения.
Изучение всасывания протеолитических и других ферментов, вводимых через рот или ректально, привело к весьма различным и порой противоречивым результатам. Это, несомненно, обусловлено не только различиями в методах исследования, но в значительной мере также трудностями, с которыми связано определение протеолитической активности в сыворотке крови в присутствии антипротеаз; при таких условиях вряд ли можно ожидать однозначных результатов при изучении дозировки и всасывания. В то же время исследования последних лет доказывают, что активация эндогенного фермента приводит к четкому фармакологическому эффекту, в частности противовоспалительному. Как подчеркивает Смит, клинические результаты, получаемые при пероральном введении ферментов, легко можно объяснить и без предположения об их всасывании в пищеварительном тракте. Проведенные недавно опыты позволяют заключить, что ферменты, принятые внутрь, индуцируют (вероятно, в самом кишечнике) образование каких-то других ферментов, активаторов или иных биологически активных веществ, которые способны всасываться, так как отличаются по своей молекулярной структуре от первоначального фермента (имеют меньший молекулярный вес). Даже всасывания частей расщепленной молекулы фермента достаточно для фармакологического эффекта.
Уже на протяжении многих лет вопросы всасывания и метаболизма изучаются с помощью радиоактивной метки. Миллер и Мартин использовали трипсин и химотрипсин, меченные 131I. При приеме внутрь эти вещества вызывали значительное повышение протеолитической активности сыворотки крови. Полагая, что меченое вещество присоединяется к альбуминам сыворотки, Миллер приходит к выводу, что это, вероятно, сам меченый фермент, но прямого доказательства всасывания последнего еще не получено. Вполне могло произойти отщепление непрочно связанного 131I. Не исключена также возможность передачи метки другим белкам (реакция, аналогичная трансаминированию), так что вывод о присутствии трипсина мог быть ошибочным.
Чтобы доказать всасывание ферментов, можно также вводить в них химическую метку — флуоресцирующий краситель, как это делают в иммунохимии. Найрин предлагает непосредственно присоединять флуоресцирующие красители к ферментам. Кэй [28] описал сходный метод определения локализации ферментов в клетках с помощью хлор-s-триазинов. Бромелин образует с нитрофенолом стойкий комплекс, который может быть выявлен в сыворотке крови после перорального введения: спустя 1,5ч в ней обнаруживается до 69% введенного вещества, а спустя 2 ч — до 86% [45]. Смит [50] использовал в своих экспериментах бромелин, превращенный в сильно флуоресцирующий комплекс путем присоединения красителя 5-диметиламино-нафтолсульфохлорида. Кроликам давали 10—50 мг меченого препарата. Главный вопрос здесь тоже состоял в том, действительно ли флуоресценция сыворотки или тканей говорит о присутствии неизмененного комплекса фермента с красителем. Исследования методом электрофореза с несомненностью показали, что в сыворотке находились интактные молекулы активного фермента, соединенные с красителем. Это служит доказательством всасывания препарата, введенного через рот. В конце опыта животных забивали и исследовали флуоресценцию; она обнаруживалась в печени, почках и моче, но ее не было в легких, сердце, селезенке и двенадцатиперстной кишке.
Смит в конце своей статьи подчеркивает, что вопрос 0.,всасывании введенного внутрь фермента представляет в основном лишь академический интерес, так как он не имеет прямого отношения к конечному фармакологическому эффекту: «Протеолитический фермент мог бы с тем же успехом действовать путем образования в кишечнике вторичных ферментов или иных биологически активных веществ, которые, всосавшись, подавляли бы воспаление» [50].