Бактериологическое исследование мокроты позволяет обнаружить возбудителей заболеваний легких. Гнойный, кровянистый комочек мокроты растирают между двумя предметными стеклами. Высохшие мазки фиксируют на огне, затем один окрашивают по Граму (см. Грама метод окраски), другой по Цилю — Нельсену. Окраска по Граму позволяет обнаружить грамположительные микробы — капсульный пневмококк (рис. 17), стрептококк, стафилококк; грамотрицательные — капсульная диплобацилла Фридлендера (рис. 18), палочка Пфейффера (рис. 19) и др. Микобактерии туберкулеза ищут в мазке, окрашенном но Цилю — Нельсену. На мазок накладывают кусочек фильтровальной бумаги, равный по площади мазку, наливают на него фуксин Циля (1 г основного фуксина растирают в ступке с несколькими каплями глицерина, затем с 10 мл 96% спирта и приливают к 90 мл 5% раствора фенола) и нагревают на нежарком пламени до появления паров. Бумажку сбрасывают, мазок опускают в 5—10% раствор серной кислоты (или 3% раствор соляной кислоты в спирте) до обесцвечивания, хорошо промывают водой, докрашивают 20—30 сек. 0,5% раствором метиленового синего и промывают водой. Красные микобактерии хорошо видны (при иммерсионной системе) на голубом фоне препарата (рис. 20). В случае ненахождения микобактерии туберкулеза в мазке прибегают к методу их накопления — флотации. 10—15 мл мокроты помещают в бутылку с покатыми плечиками емкостью 250 мл, добавляют двойной объем 0,5% раствора едкого натра и встряхивают до полного растворения мокроты. Прибавляют 100 мл дистиллированной воды и 1 мл толуола (ксилола, бензина), встряхивают 10— 15 мин., доливают воды до горлышка и оставляют на 1—2 часа. Образовавшийся сверху сливкообразный слой отсасывают пипеткой с баллончиком и наносят по каплям на подогретое стекло, каждый раз на предыдущую подсохшую каплю. Препарат фиксируют и красят по Цилю — Нельсену. При отрицательном результате прибегают к посеву мокроты (бактериологическое исследование) или прививке ее животному (биологическое исследование). Посевы мокроты используют также для определения чувствительности ее флоры к антибиотикам.
Химическое исследование. Реакция мокроты на лакмус, как правило, слабощелочная, кислой она может стать при разложении мокроты и при примешивании желудочного содержимого (кислая отрыжка, желудочно-бронхиальный свищ). Белок в мокроте происходит из воспалительного экссудата и из распада лейкоцитов. Его мало (следы) в слизистой мокроте, много (1—2%) в мокроте при пневмонии, еще больше при отеке легкого. Для его определения к мокроте прибавляют двойное количество 3% раствора уксусной кислоты, энергично взбалтывают, фильтруют и в фильтрате определяют белок одним из обычных способов (см. Моча). Учитывают трехкратное разведение.
Бактериоскопическое, бактериологическое и биологическое исследования. Изучение микробной флоры мокроты необходимо для уточнения диагноза и для правильного выбора метода лечения. Этой цели служат бактериоскопическое, бактериологическое и биологическое исследования. Бактериоскопическое исследование достигает цели при относительно большом содержании микробов в мокроте. Для приготовления препаратов гнойный комочек переносят на наружную треть предметного стекла, накрывают такой же частью другого предметного стекла и растирают между ними. Мазкам дают высохнуть, фиксируют трехкратным проведением через пламя газовой горелки и окрашивают, один по Граму (см. Грама метод окраски), другой по Цилю — Нельсену (см. Туберкулез, лабораторные исследования). Окраска по Граму позволяет выявить грамположительный капсульный пневмококк, грамотрицательную капсульную пневмобациллу Фридлендера, палочку Пфейфера (цветн. рис. 5, 6 и 8), стафилококк, стрептококк, палочку Венсана, спириллы, катаральный микрококк и др. При исследовании отмечают количество найденных в поле зрения бактерий (мало, умеренно, много) и преобладание какого-либо вида. Способом Циля — Нельсена окрашивают кислотоупорные микробы, главным образом микобактерии туберкулеза. Микобактерии при этой окраске получаются красного цвета и хорошо видны на голубом фоне (цветн. рис. 1).
Несколько больший процент микобактерий туберкулеза выявляют при помощи люминесцентной микроскопии (см.). Светящиеся микобактерии хорошо видны при исследовании мазка с сухим объективом Х40 при окуляре ХЮ. Мазки приготовляют и фиксируют, как обычно, затем заливают на 5—10 мин. раствором красителя (аурамин 1 : 1000, акридин оранжевый, смесь аурамина и родамина), промывают водой, обесцвечивают 5 мин. солянокислым спиртом, опять промывают водой и обрабатывают
раствором кислого фуксина (кислый фуксин 1 г, уксусная кислота 1 мл, дистиллированная вода 500 мл) или метиленового синего, которые гасят свечение фона. Препарат рассматривают в ультрафиолетовом свете (цветн. рис. 2).
Для облегчения поисков микобактерий туберкулеза прибегают к методам накопления, из которых чаще применяют метод флотации. 10—15 мл мокроты помещают в эрленмейеровскую колбу или бутылку с покатыми плечиками емкостью 250 мл, добавляют равный объем 0,5% раствора едкого натра и встряхивают смесь до гомогенизации ее. Прибавляют 50 мл дистиллированной воды и 1 мл толуола (ксилола, бензина), встряхивают, снова добавляют воду до половины бутылки и встряхивают 10—15 мин., затем доливают воду до горлышка и оставляют на 1—2 часа. Образующийся сверху сливкообразный слой отсасывают пипеткой с баллончиком, наносят на подогретое предметное стекло, подсушивают, фиксируют и окрашивают по Цилю — Нельсену.
Бактериологическое исследование применяют для идентификации микробов, определения их лекарственной устойчивости, вирулентности и т. д. Мокроту засевают на соответствующие питательные среды — плотные (кровяной агар) или жидкие (сахарный бульон, среды Тароцци), полусинтетическую среду Школьниковой; (цветн. рис. 3 и 4). Выросшие на соответствующих питательных средах микробы идентифицируют, определяют их патогенность (в некоторых случаях) и лекарственную устойчивость, предварительно определяют лекарственную устойчивость всей флоры мокроты в целом. Это производят путем посева кусочков мокроты, предварительно отмытых физиологическим раствором, на поверхность кровяного агара в чашке Петри. На посев раскладывают стандартные антибактериальные бумажные диски. О чувствительности флоры судят по величине зоны задержки роста флоры вокруг диска. Затем производят окончательное определение устойчивости каждого выделенного из мокроты вида бактерий отдельно. Для этого 18-часовую бульонную культуру каждого вида бактерий (стафилококки, стрептококки, клебсиеллы и др.) засевают газоном на чашки Петри с кровяным агаром. На газон раскладывают стандартные бумажные диски с антибиотиками, прижимая их пинцетом к поверхности агара так, чтобы они плотно прикасались к агару всей поверхностью. Чашки оставляют при комнатной температуре на 1,5—2 часа; за это время происходит достаточная диффузия препарата из дисков в окружающие агаровые слои. Затем чашки Петри помещают в термостат при t°37° на 18—24 часа. Об устойчивости исследуемого штамма судят по зоне задержки роста бактерий вокруг дисков. При отсутствии зоны задержки штамм считают устойчивым. Если образуется зона 1,5—2 см в диаметре, штамм считают слабо чувствительным, а при зоне более 2 см — чувствительным к данному антибиотику.
О посеве мокроты на микобактерии туберкулеза см. Туберкулез легких, исследование мокроты на микобактерии туберкулеза; об определении их чувствительности к антибиотикам см. Туберкулез легких, лекарственная устойчивость микобактерий.
При биологическом исследовании мокроты заражают животных. В качестве диагностического этот метод вытесняется культуральными способами.