Для определения подвижности семенных нитей сперму необходимо исследовать в 1-й час эякуляции (А. И. Васильев, 1932; Р. Я. Кишиневская, 1949; Е. П. Майзель, 1952; И. С. Розовский, 1961; Eichenberger, 1949; Michalke, 1954) или в первые 3 часа (McLeod, 1951).
Подсчет подвижных семенных нитей начинают не ранее чем через 20—30 минут с момента эякуляции. Этот интервал необходим для процесса разжижения спермы, после которого подвижность спермиев достигает максимума (А. А. Шорохова, 1933; Kuhnelt, 1953; Borelli, 1954; Vasterling, 1960). Другие авторы (П. Я. Герке, 1956; Gertler, 1949) считают, что лучшая подвижность наблюдается через час после эякуляции и именно в это время следует производить ее определение. По данным С. А. Каган (1969), продолжительность времени разжижения эякулята здоровых мужчин колебалась от 8 до 23 минут, при патологии спермы — от 8 до 30 минут.
Обычно в большинстве лабораторий ведется счет активных семенных нитей в нескольких полях зрения микроскопа. Эта методика обычно приводит к преувеличению количества подвижных клеток. Чаще же после исследования пациенты получают на руки заключение о том, что в эякуляте имеется большое количество подвижных семенных нитей. По этому ответу ни в коей мере нельзя судить об оплодотворяющей способности спермы, так как необходимо знать точный процент хорошо и плохо подвижных семенных нитей, а также неподвижных.
Более точный результат может быть получен при использовании методики, предложенной Hotchkiss (1936), по которой счет подвижных спермиев ведется при помещении в окуляр микроскопа диска с вырезом (окно в 1/4 поля зрения). Подсчет начинают через 10 секунд с начала наблюдения. Прежде всего подсчитывают активные спермин, имеющие прямолинейно-поступательное движение, затем (раздельно) плохо подвижные и неподвижные семенные нити. Каждый итог умножают на четыре для определения результата во всем поле зрения, и вычисляют процентное соотношение.
Salvatiera и Sureda (1958) судили о характере подвижности спермиев по способности последних продвигаться по вертикальному капилляру диаметром 1 мм, наполненному изотоническим раствором глюкозы или фруктозы. Эта методика явилась некоторой модификацией методики Ботелла, предложенной в 1953 г. и разработанной им в дальнейшем (1956, 1964), по которой подобное же исследование проводилось в горизонтально расположенном капилляре, на одном конце которого располагалась сперма, на другом — шприц с 0,1 мл секрета цервикального канала. Преимущество этой методики заключается в том, что, кроме определения числа спермиев, проникающих в капилляр (длина 2 см, диаметр просвета 1 мм), подсчитывают количество и качество семенных нитей, достигших цервикальной слизи. Botella, произведя исследование 100 эякулятов с различными диагнозами (норма и патология), ни в одном из них не обнаружил в шприце патологических форм спермиев. По мнению автора, секрет цервикального канала женщины является своеобразным фильтром для дегенеративных форм семенных нитей.
Gassner (1959) для определения характера подвижности спермиев предложил следующую методику. Две камеры, одна из которых наполнена спермой, а другая — той же семенной жидкостью, но без спермиев, соединены между собой сеткой с отверстиями размером 10 мк. По количеству семенных нитей, прошедших из одной камеры в другую, судят о подвижности спермиев. Опыт проводят в термостате.
Более простым и сравнительно точным установлением скорости движения спермиев является методика Силло (1959). На стеклянной линзе, помещенной в окуляр и свободно вращающейся, делают две насечки. При движении спермия линза поворачивается так, чтобы он двигался строго между ее отметками, которые соответствуют расстоянию 0,5 мм. Фиксируют время прохождения семенной нитью этого расстояния.
Hynie (1964) определяет время, необходимое для прохождения 100 спермиями отрезка пути между двумя параллельными линиями одного малого квадрата (0,02 мм) счетной камеры. Среднюю скорость движения спермиев подсчитывают по формуле:
где V — скорость в мк/сек; d — число спермиев в млн/мл; t —время прохождения 100 спермий в сек.
В числителе константа — 140 000.
И. М. Порудоминский (1960) для подсчета подвижности семенных нитей разбавляет эякулят физиологическим раствором в 10—20 раз (в зависимости от его густоты), а затем в специальной камере ведет счет только неподвижных спермиев. Следующую порцию эякулята он разбавляет раствором, состоящим из 5 частей двууглекислого натрия, 1,0 формалина и 100 мл дистиллированной воды, набирая в другой смеситель, как и раньше, из расчета 1:10 или 1:20. Содово-формалиновый раствор вызывает неподвижность спермиев. Счетную камеру вновь заполняют и подсчитывают все семенные нити в 5 больших квадратах. После этого легко можно вычислить процент подвижных спермиев.
П. Я. Герке (1956) не рекомендует разводить эякулят физиологическим раствором, так как при этом ухудшается подвижность спермиев. Он предлагает для этой цели рингеровский раствор или жидкость следующего состава: фосфорнокислого натрия двузамещенного (Na2HPO4 12Н2O) 2,04 г, фосфорнокислого калия однозамещенного (КН2РО4)—0,08 г, глюкозы 3,2 г и дистиллированной воды 100 мл.
По методике Sillo-Seidl (1961) определение подвижности спермиев производят в счетной камере, где при разведении эякулята физиологическим раствором подсчитывают количество лишь неподвижных семенных нитей. Затем путем внешних воздействий (например, при высокой температуре) достигают прекращения подвижности всех спермиев. Вновь производят подсчет семенных нитей. Увеличение их числа при вторичном подсчете происходит за счет первоначально бывших подвижными спермиев.
Все эти методики, к сожалению, дают представление лишь о числе подвижных и неподвижных спермиев. Для суждения же о качестве эякулята необходимо определить раздельно точный процент активно подвижных, плохо подвижных и неподвижных семенных нитей.
Для этой цели И. М. Порудоминский (1964) предлагает рассматривать два вида подвижности: а) спермин с поступательным движением вперед — хорошо подвижные, б) семенные нити с колебательными движениями на одном месте, с круговыми движениями на одном месте, с круговыми движениями без поступательного направления вперед (манежные движения) и другими видами патологического перемещения, рассматриваемые как неподвижные. Если при подсчете подвижных спермиев принимают во внимание только прогрессивно движущиеся семенные нити, то тем самым учитывают в известной мере и качество подвижности.
В 1964 г. Чакъров и Начев предложили новую оригинальную методику для определения характера подвижности спермиев человека. Производят сперматокинезиграфический анализ эякулята, что достигается фотографированием помещенной в счетную камеру спермы. Авторы по фотограмме различают три категории подвижности — неподвижные, вибрирующие и подвижные. В зависимости от скорости движения третья категория делится на пять групп. Чакъров (1964) при исследовании 252 эякулятов по вышеприведенной методике приходит к заключению о ее ценности для решения вопроса о качестве спермы (рис. 10).
Рис. 10. Неподвижные спермии (четко видимые). Спермии с различными вариантами подвижности (от волнистой густой на небольшом протяжении до ровной сравнительно длинной линии). Снимок спермы по фотокинезиграфическому методу (Чакиров).
В 1964 г. вышла работа Братанова и соавторов, подтверждающая ценность методики сперматокинезиграфической характеристики подвижности спермиев. Авторы использовали данную характеристику в практике животноводства.
Для установления характера подвижности А. Б. Байдер и соавторы (1959) предложили специальную камеру с обогревом, в которой производят исследование, так как охлаждение капли эякулята на предметном стекле может значительно снизить подвижность спермиев.
Изучение характера подвижности спермиев мы начинаем через 60 минут после эякуляции. Определение подвижности по прошествии менее 20—30 минут с момента эякуляции считается грубой ошибкой (время разжижения спермы). О характере движения спермиев можно судить при просмотре препарата на предметном стекле при увеличении под микроскопом в 280—400 раз. Нормальные семенные нити обычно движутся против тока жидкости (реотаксис). На этом основано их продвижение по половому аппарату женщины. Ток жидкости легко создать на предметном стекле, слегка приподняв один из его углов. Такая незначительная манипуляция дает возможность легко отличить спермии по характеру их движения, так как все активно перемещающиеся спермии устремляются против этого тока в одном направлении. Семенные нити, обладавшие до этого плохой подвижностью, продолжают передвигаться беспорядочно. Кроме того, поле зрения микроскопа мы разделяли на четыре равные части, что достигалось помещением в окуляр двух отрезков конского волоса, которые располагались в виде перекрещивающихся под прямым углом диаметров. Это приспособление, на наш взгляд, более приемлемо, чем предложение Hotchkiss (1936) помещать в окуляр диск с вырезом (окно в 1/4 поля зрения). При этой методике не видно всего поля зрения, а при олигоспермии часто наблюдаются отдельные скопления неподвижных или плохо подвижных семенных нитей, которые могут попасть именно в вырезанную часть диска и быть подсчитанными. В результате эякулят может быть неправильно охарактеризован. При нашем методе (М. А. Кунин, 1962) просматривается все поле зрения. При этом легче выбрать более однородные места препарата, в которых ведется счет отдельно в каждой 1/4 части. Считают все видимые спермин до 100, отдельно фиксируют хорошо и плохо подвижные семенные нити, а также неподвижные, выводят их процентное содержание. Подобный подсчет затруднителен при большой концентрации спермиев в эякуляте (более 180 млн. в 1 мл).
При определении характера подвижности семенных нитей мы не пользовались специальным подогреванием препарата. Мы пришли к выводу, что при комнатной температуре (18—22°) нарушение подвижности спермиев наступало медленнее, чем при сохранении эякулята в термостате при температуре 37°.
Хорошо подвижными мы считали те семенные нити, которые имели прямолинейное поступательное движение. При таком перемещении хвост спермия совершает активное движение, а головка не претерпевает значительных латеральных колебаний. Плохо подвижными считались те семенные нити, которые перемещались не прямолинейно, а по кругу или маятникообразно, без значительного продвижения или в виде подергиваний, дрожательных колебаний на месте. При подобном движении хвосты спермиев и их головки совершают значительные, часто медленные колебания вокруг точки, находящейся в шейке (центр движения).
Наличие в эякуляте более 70% активно подвижных семенных нитей дает основание говорить о хорошей подвижности. Присутствие в эякуляте менее 70% таких нитей свидетельствует о плохой подвижности спермиев.
Хорошая подвижность спермиев встретилась в 48,4%, плохая — в 51,6% наших наблюдений. Ни в одном случае не удалось обнаружить совершенно неподвижные семенные нити. Хорошая подвижность спермиев отмечена при наличии 60 млн. и более семенных нитей в 1 мл эякулята в 83,3% наблюдений. При концентрации спермиев от 40 до 59 млн. хорошая их подвижность встретилась лишь в 15,4 % случаев, а при концентрации от 10 до 39 млн.— в 1,3% случаев. При числе семенных нитей менее 10 млн. в 1 мл эякулята подчас наблюдались спермин с активно поступательным движением, но их процентное отношение к общему числу семенных нитей в сперме ни в одном случае не превышало 70. Таким образом, хорошая подвижность спермиев (до 70%) наблюдается чаще при достаточном количестве семенных нитей в эякуляте (более 60 млн. в 1 мл), что соответствует нормоспермии.