В дальнейших обширных сериях экспериментов мы исследовали действие нашего ферментного препарата не только in vitro, но и in vivo — на имплантаты различных опухолей у крыс и мышей, на индуцированные химическими агентами опухоли у крыс и на спонтанные карциномы молочных желез у собак. Было изучено также действие препарата, созданного Гашлером, — карцоделана. В обоих случаях удалось показать Несомненное и значительное повреждение раковых клеток без какого бы то ни было влияния на нормальные ткани, хотя карцоделан оказался существенно менее эффективным, чем использованная нами ферментная смесь.
Гораздо меньшая эффективность карцоделана в экспериментах на животных, а позже и при клиническом испытании была связана с существованием ингибиторов, содержание которых в сыворотке подвержено резким индивидуальным колебаниям.
Дезактиватор имеется во всех тканях и органах, кроме зобной железы. У раковых больных его не удается обнаружить ни в опухоли, ни в том органе, в котором возникла опухоль; в органах же, не пораженных опухолью, он находится в форме лактона. В этой форме он не способен инактивировать защитное вещество (ингибитор) — он биологически инертен.
Введение карцоделана или наших препаратов непосредственно в солидную мышиную карциному Эрлиха приводило к статистически достоверной регрессии опухоли. Она частично изъязвлялась или некротизировалась, в других случаях несколько уменьшалась. Хотя болезнь заканчивалась смертью, продолжительность жизни существенно возрастала.
При парэнтеральном введении (внутримышечном, внутрибрюшинном или подкожном) карцоделан не оказывает на опухоль никакого или почти никакого влияния— вероятно, из-за «лимфоцитарного барьера», который изолирует ткань карциномы от сосудистого русла и не пропускает в нее ферменты. Кроме того, воздействие ферментов на экспериментальные опухоли, несомненно, ослабляют ингибиторы, которые содержатся в крови и тканях разных особей в различном количестве и обладают различной активностью.
Сходные результаты были получены и с нашими ферментными смесями. Введение их в опухоль давало выраженный эффект; парэнтеральное применение оказывало более слабое действие. Однако при парэнтеральной ферментной терапии результаты были значительно лучше, если одновременно вводили кортизон или цитостатические препараты, которые разрушали лимфоцитарный барьер. В этом случае можно было наблюдать заметную регрессию опухолей и прекращение или замедление их роста.
Все эти исследования и результаты испытаний, естественно, привели нас к выводу, что наряду с активными ферментами, входящими в нашу смесь, желательно было бы вводить вещества, способные тормозить или блокировать действие высокоактивных ингибиторов, содержащихся в сыворотке при наличии рака. Изучение этого вопроса было главной целью автора (Вольфа) в период его тесного сотрудничества с Фрейндом, после того как уже выяснилась взаимосвязь между ингибиторами и антиингибиторами. Был исследован целый ряд веществ, обладающих антиингибиторным действием, с использованием описанного выше метода культуры клеток, а также химически индуцированных и спонтанных опухолей животных. Удалось выявить вещества, обладающие соответствующей активностью; это были главным образом смеси фосфолипидов и липопротеидов, экстрагированных из различных железистых тканей. Эффективными оказались также смеси аминокислот, ди- и полипептидов, оксидоредуктазы из печени, растительные полисахариды и липиды.
При исследовании экстракта из поджелудочной железы теленка выяснилось, что активность чистого трипсина и химотрипсина резко подавляется «раковой» сывороткой, но это ингибирующее действие может быть блокировано или вообще отсутствовать, если панкреатический экстракт содержит амилазу и липазу, а также некоторые другие вещества.