Для обнаружения палочки инфлюенцы пенициллин прибавляли в питательную среду с агаром, на которую делали посев смыва из носоглотки больных. Благодаря наличию пенициллина в среде задерживался рост стрептококков и стафилококков и пышно росла только культура палочки инфлюенцы, на которую пенициллин не действовал и росту которой на простой среде препятствовали другие микробы.
В 1932 году английский химик Райстрик сделал попытку очистить препарат, но он оказался неустойчивым и о нем снова забыли.
В 1941 году в Англии ученые Г. Флори и Чейн в результате длительной работы получили очищенный пенициллин и впервые применили его для лечения четырех больных тяжелым сепсисом (заражение крови). Результаты лечения этих безнадежных больных, которые несомненно погибли бы, показали огромную ценность нового лекарства. Но провести широкое испытание этого препарата оказалось затруднительным. Ведь в лаборатории можно было получить только небольшое количество пенициллина. Естественно, возникла мысль о необходимости организации производства этого антибиотика. Но в Англии во время войны не было средств, и Флори и Чейн отправились в США, где впервые в 1942 году было организовано промышленное получение этого препарата.
В начале Великой Отечественной войны в Советском Союзе не было ни плесени, с которой работали Флори и Чейн, ни метода получения очищенного препарата. Поиски советского пенициллина были начаты в 1942 году в лаборатории биохимии микробов Всесоюзного института экспериментальной медицины (ВИЭМ), в которой в течение многих лет велись работы над антимикробными веществами — бактериофагом, лизоцимом и другими. Из 93 штаммов (рас) зеленой плесени, выделенных 3. В. Ермольевой и Т. И. Балезиной, один оказался наиболее активным и был назван пенициллин-крустозином ВИЭМ.
Полученный советскими учеными пенициллин делал чудеса, спасая обреченных на смерть больных сепсисом, безнадежных больных с тяжелыми травмами мозга. Пенициллин излечивал маленьких детей от воспаления легких и менингита. Он избавлял и от такого заболевания, как сифилис. Уже в 1943 году его с успехом применили и в ветеринарии для лечения копытной болезни оленей.
После первых испытаний советского пенициллина в хирургической клинике его применили для лечения огнестрельных ранений на одном из фронтов Великой Отечественной войны. Большая бригада ученых под руководством академика Н. Н. Бурденко и профессора 3. В. Ермольевой изучала действие отечественного пенициллина при различных ранениях.
Препарат спасал воинов, погибавших от заражения крови, он давал эффект при лечении газовой гангрены, предупреждал развитие гнойных процессов в ранах после хирургической обработки, ликвидировал гнойные процессы при тяжелых ранениях черепа, излечивал рожистое воспаление и воспаление легких.
До открытия пенициллина, особенно в первую мировую войну, для лечения гнойных ран пользовались антисептиками (карболовой кислотой, лизолом). Но эти вещества имеют очень существенный недостаток — вместе с микробами они убивают и клетки ткани и вызывают омертвление поверхности ран. Пенициллин, в отличие от антисептиков, не оказывает вредного действия на ткани животных и человека.
При испытаниях пенициллина в клинике было установлено, что он не оказывает вредного действия на кровь и сам не утрачивает своей активности в присутствии крови, сыворотки и гноя.
В январе 1944 года в Советский Союз приехали английские ученые Флори и Сандерс. Они привезли свой штамм плесневого гриба и образцы препаратов очищенного пенициллина, так как не знали, что наша медицина уже имеет пенициллин-крустозин ВИЭМ. По заключению Флори, который изучал штаммы плесневого гриба и испытывал пенициллин в клинике, штамм, полученный в СССР, не уступал английскому. Более того, результаты лечения показали, что советский препарат может быть применен даже в меньших дозах.