Эрлиха диазореакция

Эрлиха диазореакция — это качественная проба обнаружения биологически важных веществ в крови и моче. Основана на неспецифической цветной реакции между диазореактивом Эрлиха и некоторыми органическими веществами (пиррол, крезол, индикан, белки, содержащие аминокислоты тирозин, триптофан, гистидин и др.).

Диазореакция в моче. Реактивы: 1) диазореактив (0,5 г сульфаниловой кислоты и 5 мл 25% раствора соляной кислоты в 100 мл воды); 2) 0,5% раствор азотистокислого натрия.

Методика выполнения этой реакции: к 4 мл I реактива прибавляют 1—2 капли II реактива, приливают 4 мл мочи, потом 1 мл 10% раствора аммиака; пробирку закрывают пробкой и взбалтывают жидкость до появления пены. Проба считается положительной при розовой или красной окраске и отрицательной — при желтой или оранжевой. Положительная реакция наблюдается при  многих лихорадочных заболеваниях: брюшном и сыпном тифе, милиарном туберкулезе, лимфогранулематозе, кори, трихинеллезе и др. При наличии билирубина в моче появляется с диазореактивом красное окрашивание мочи еще до прибавления аммиака.

Диазореакция в крови. Применяется при определении билирубина, с которым смесь диазореактивов в определенных соотношениях дает красное окрашивание. Диазореакция Эрлиха  лежит в основе большинства методов количественного и качественного определения билирубина (см.).

Пол Эрлих
Пол Эрлих, 1915 год

Эрлиха диазореакция (P. Ehrlich) — цветная реакция между диазореактивом Эрлиха и рядом органических веществ (пиррол, крезол, индикан и др.), вступающих в соединение с азогруппой (—N=N—), используемая для количественного определения биологически важных веществ в крови и моче.

Приготовление диазореактива: в раствор 5 г сульфаниловой кислоты в 50 мл крепкой соляной кислоты (d=1,12) добавляют воду до объема 1 л; к полученному раствору добавляют 0,5% раствор азотистокислого натрия. При этом образуется диазофенилсульфоновая кислота (реактив Эрлиха), которая образует окрашенные азосоединения с некоторыми биологически важными веществами, находящимися в крови и моче.



Широкое применение диазореакция Эрлиха получила в клинике при качественном и количественном определении билирубина в крови (см. ниже). Диазореактив используют также для определения тирозина, гистидина и гистамина. Белки, в молекулу которых входят аминокислоты — тирозин, триптофан и гистидин, дают с диазореактивом оранжево-красное окрашивание. При определении некоторых веществ в качестве компонента для получения окрашенного азосоединения употребляется не сульфаниловая кислота, а другие циклические соединения, например при определении фенолов в крови и в моче — паранитроанилин, при определении сульфаниламидов — 2R-кислота и т. д.      

Диазореакция в крови. Билирубин при диазореакции дает характерное красно-фиолетовое окрашивание. Это явление было использовано для большинства методов качественного и количественного определения билирубина крови. В настоящее время чаще всего применяют метод Ендрашика, позволяющий определять раздельно фракции билирубина.

Реактивы: а) кофеиновый реактив: 5 г кофеина, 7,5 г бензойнокислого натрия и 12,5 г уксуснокислого натрия растворяют при небольшом подогревании в дистиллированной воде и доливают водой до 0,1 л; б)диазореактив: первый реактив — 1 г сульфаниловой кислоты растворяют в небольшом количестве воды и, прибавив 15 мл концентрированной HCl, доливают водой до 1 л; второй реактив — 0,5% раствор азотистокислого натрия.

Перед употреблением смешивают 10 мл первого реактива и 0,25 мл второго. Для определения общего билирубина к 1 мл сыворотки приливают 3,5 мл кофеинового реактива и 0,5 мл диазореактива, а при определении прямого билирубина к 1 мл сыворотки прибавляют 3,5 мл физиологического раствора и 0,5 мл диазореактива. Хорошо перемешав, обе пробы через 5 мин. колориметрируют против компенсационного раствора, состоящего из 1 мл сыворотки, 3,5 мл кофеинового реактива и 0,5 мл физиологического раствора при зеленом светофильтре. Непрямой билирубин определяется вычитанием из общего прямого.

Диазореакция в моче состоит в прибавлении к 10 мл свежей мочи 10 мл диазореактива и 2 мл 10% раствора аммиака. При этом после энергичного взбалтывания появляется розовое или карминово-красное окрашивание. Реакция считается положительной, если окрашены не только жидкость, но и образовавшаяся пена. Желтый или оранжевый цвет свидетельствует об отрицательном результате. В сомнительных случаях образование на следующий день осадка сине-зеленого или черного цвета позволяет считать реакцию положительной. В настоящее время эта реакция не имеет практического значения, так как она неспецифична и характерна для многих лихорадочных заболеваний: брюшного и сыпного тифов, милиарного туберкулеза, полисерозита, кори, лимфогранулематоза, пневмонии, дифтерии, рожистого воспаления, трихинеллеза. Кроме того, лекарственные препараты: опий, морфин, дионин, атофан, гексаметилентетрамин, ревень, героин, хризаробин, сальварсан — дают похожее окрашивание, а препараты танина, фенол и его производные, крезол, гваякол и салол мешают реакции.