При пробирочном способе в пробирку наливают точно отмеренные 4 мл 3% раствора хлорида натрия и вливают туда кровь (1 пипетку от гемометра ГС-3), промывают пипетку раствором. Перед подсчетом резиновую трубку снимают со смесителя, концы его зажимают между большим и средним пальцами и сильно встряхивают не менее 2 мин. Затем выпускают из кончика смесителя две капли на сторону, а третьей заполняют предварительно подготовленную счетную камеру (см. Камеры счетные). На чисто вымытую и вытертую камеру накладывают чистое шлифованное покровное стекло так, чтобы края его опирались на две боковые выступающие полоски камеры. Скользящим передвижением покровного стекла притирают его к камере так, чтобы с обеих сторон появились радужные кольца или линии. Затем заполняют камеру через щель между камерой и покровным стеклом; если кровь брали в смеситель, то к щели подносят небольшую каплю на кончике смесителя; если кровь брали в пробирку, то после встряхивания пробирки в нее опускают стеклянную палочку и переносят висящую каплю.
Рис.3. Схема подсчета эритроцитов в большом квадрате. Пунктир со стрелкой указывает порядок передвижения по малым квадратам (в счет включают только эритроциты, закрашенные черным).
Через 1 минуту, когда эритроциты осядут, производят подсчет их в затемненном поле микроскопа при объективе 40 X и окуляре 7х (или объективе 8 X и окуляре 15 X). Сосчитывают эритроциты на площади пяти больших квадратов, передвигаясь по горизонтальным рядам малых квадратов и включая в счет эритроциты, лежащие внутри квадрата и на двух пограничных линиях — левой и верхней или правой и нижней (рис. 3). Найденное число умножают на 10 000 и получают число эритроцитов в 1 мм3.
Для подсчета лейкоцитов выбирают смеситель, имеющий над ампулой метку «11». Кровь насасывают до метки «0,5», а затем 3% раствор уксусной кислоты, подкрашенный до ярко-голубого цвета раствором метиленового синего, до метки «11». Камеру заполняют после встряхивания смесителя в течение 1 минуты и выпускания двух капель, так же как для эритроцитов. Подсчитывают лейкоциты на площади 100 больших квадратов (минимум 50). В сетке Горяева удобно считать на всех неразграфленных квадратах (их 100) в том же порядке, как и при подсчете эритроцитов. Наиболее подходящее увеличение — объектив 8х, окуляр 10X. Результат подсчета умножают на 50. В приборах, осуществляющих автоматический подсчет форменных элементов крови, работа производится по прилагаемым к ним инструкциям.
Зная количество гемоглобина и число эритроцитов, высчитывают цветной показатель крови. Это условная величина, показывающая степень насыщения эритроцита гемоглобином. Нормальный цветной показатель условно принят за 1 (см. Гиперхромазия, гипохромазия). Чтобы вычислить цветной показатель, если количество гемоглобина выражено в грамм-процентах, надо три первые цифры грамм-процентов гемоглобина умножить на 3 и разделить на две первые цифры числа эритроцитов (или только на первую, если эритроцитов меньше 1 000 000). Пример: гемоглобина 10,2 г%; эритроцитов 3 400 000 в 1 мм3; цветной показатель (10,2x3)/34 =30,6/34 = 0,9.
Если количество гемоглобина выражено в единицах, то делят число единиц на удвоенные две первые цифры числа эритроцитов.
Для подсчета лейкоцитарной формулы приготовляют окрашенные мазки крови. Предметные стекла обезжиривают, прожигая их на газовой горелке или выдерживая в смеси спирта с эфиром. Концом предметного стекла прикасаются к выступившей из места укола маленькой капле крови и сразу же делают мазок. Для этого край шлифованного стекла, более узкого, чем предметное, ставят впереди капли крови под углом 45° (рис. 2,7), отводят его назад до соприкосновения с каплей (рис. 2,2), дают ей растечься по краю шлифованного стекла и скользящим движением проводят этим краем по предметному стеклу так, чтобы кровь потянулась за ним и размазалась тонким слоем (рис. 2,3).
Рис. 4. Вид правильно сделанного мазка крови.
Мазок должен получиться полупрозрачным, желтым, равномерным, покрывающим 2/3—3/4 предметного стекла (рис. 4). После высыхания на нем пишут грифельным карандашом или углом другого стекла фамилию больного. Мазки фиксируют погружением в метиловый спирт на 3 мин., или в смесь 96% этилового спирта и эфира (поровну) на 20—30 мин., или в 96% этиловый спирт на 30 мин. и окрашивают по методу Романовского — Гимзы. Краситель является смесью кислой (эозин) и основной (азур-П) красок. Сущность этой окраски состоит в том, что клетки крови и их части в зависимости от реакции среды в них окрашиваются по-разному, что позволяет их различать. Продажный краситель разводят из расчета 1—1,5—2 капли красителя на 1 мл нейтральной дистиллированной воды.
Картина крови при различных методах окраски. Рис. 1. Окраска мазков нейтральным красным и янусом зеленым по Сейбин. Рис. 2. Суправитальная окраска мазков ярким крезиловым синим. Рис. 3. Окраска телец Гейнца метиленовым фиолетовым. Рис. 4. Окраска мазков по Крюкову и Паппенгейму. Рис. 5. Окраска мазков по Лейшману. Рис. 6. Окраска мазков по Гимзе. Рис. 7. Окраска мазков эозин-метиленовым голубым по Маю — Грюнвальду. Рис. 8. Окраска мазков по Нохту — Максимову. Рис. 9. Окраска мазков карболфуксинметиленовым синим по Фрейфельд для выявления патологической зернистости. Рис. 10. Оксидазная реакция по методу Винклера— Шультце. Рис. 11. Пероксидазная реакция по методу Грэма. Рис. 12. Одновременная окраска ретикулоцитов и тромбоцитов по Алексееву.