Борде - Жангу реакция

Борде - Жангу реакция (реакция связывания комплемента, РСК) — иммунологическая реакция, основанная на свойстве комплекса «антиген — антитело» фиксировать свободный комплемент. РСК протекает в две фазы: 1) адсорбция антител на антигенах; 2) выражение реакции в присутствии гемолитической системы (гемолиз). Для постановки РСК изучаемые объекты (антитела и антигены) помещают в условия, обеспечивающие их взаимодействие в присутствии комплемента; затем к анализируемой иммунной системе добавляют «индикатор» — гемолитическую систему.Если комплемент фиксировался иммунной системой, гемолиза не происходит (положительная РСК; рис., а); если же иммунная система не фиксировала комплемент и ее компоненты не соответствуют друг другу, гемолиз происходит (отрицательная РСК; рис., б). Ингредиенты реакции: 1) испытуемая сыворотка, инактивированная прогревом в течение 30 мин. при t° 56°; 2) антиген (взвеси бактерий, экстракты органов и тканей, вирусы); 3) комплемент (свежая сыворотка морской свинки); 4) гемолитическая система (сенсибилизированные эритроциты барана, инкубированные с гемолитической сывороткой в течение 30 мин. при t° 37°). Для разведения ингредиентов используют изотонический раствор хлорида натрия. Первый этап РСК продолжается 60 мин. при t°  37° или 18—20 час. при t° 4—6° (более чувствительная РСК), второй этап — 60 мин. при t° 37°.



В диагностической практике и судебной медицине используют различные модификации РСК — качественные и количественные. См. также Вассермана реакция, Серологические исследования.


Схема реакции связывания комплемента: а — положительная; б — отрицательная. 1 — комплемент; 2 — сыворотка больного; 3 — сыворотка здорового; 4 — антиген; 5 — гемолитическая сыворотка; 6 — эритроциты барана.

Борде - Жангу реакция [J. Bordet, О. Gengou; син.: реакция отклонения комплемента, реакция фиксации алексина (комплемента), реакция связывания комплемента (РСК)] — иммунологическая реакция, основанная на свойстве комплекса антиген -— антитело фиксировать свободный комплемент. РСК протекает в 2 фазы: 1) адсорбция антител на антигенах, 2) выражение реакции (бактериолиз или гемолиз), для которого необходимо присутствие комплемента. Зависимость бактериолитических реакций от присутствия комплемента позволяет выявить взаимодействие антител с антигенами в реакции Борде - Жангу. Показателем соответствия антител в этой реакции служит фиксирование комплемента соответствующими иммунными системами, выявляемое добавлением к реакционной смеси «индикаторной» гемолитической системы.

Реакция Борде - Жангу осуществляется в два этапа: сначала изучаемые антигены и антитела помещают в условия, обеспечивающие их взаимодействие в присутствии комплемента, а после завершения адсорбции к анализируемой иммунной системе добавляется гемолитическая система (гемолизин + + эритроциты). При соответствии антигенов и антител происходит их взаимодействие и присутствующий в реагирующей смеси комплемент фиксируется иммунной системой. В этом случае при добавлении индикаторной системы гемолиза не происходит ввиду отсутствия комплемента (реакция положительная). Если анализируемые антитела не адсорбируются на антигенах, то комплемент в реагирующей смеси остается свободным и при добавлении гемолитической системы осуществляется гемолиз (реакция отрицательная).

Принцип разработанного Борде и Жангу метода серологического анализа лег в основу многочисленных модификаций реакции, используемой в диагностической практике и научно-исследовательской работе.



Обычная РСК, при которой регистрируется 100% лизис эритроцитов, предусматривает необходимость предварительного титрования комплемента; последний добавляется к иммунной системе в дозе, не превышающей необходимой для гемолитической реакции. Схемы постановки реакции определяются ее целью. В опыте могут испытываться различные дозы антигена при постоянном содержании сыворотки и комплемента, различные разведения сыворотки при постоянных дозах антигена и комплемента и т. д. Ингредиентами реакции являются: 1) испытуемая сыворотка, прогретая в течение 30 мин. при 56° с целью инактивации присутствующего в ней комплемента; 2) антигены (в качестве которых используют суспензии бактерий, экстрагированные из них белки, полисахариды и др.), экстракты из клеток растений и животных, вирусы и т. д., 3) комплемент — свежая сыворотка морских свинок, 4) гемолитическая система (сенсибилизированные бараньи эритроциты) — 5% суспензия эритроцитов, контактировавших с гемолитической сывороткой в течение 30 мин. при t° 37°.

Для разведения ингредиентов используют физиологический раствор NaCl. Антикомплементарность отдельных ингредиентов испытывается в контрольных пробах. Первый этап реакции (адсорбция антител) осуществляется при t° 37° в течение 60 мин. либо при 4—6° в течение 18— 20 час. (РСК на холоде). В последнем случае происходит более полная фиксация комплемента, что увеличивает чувствительность метода. На втором этапе реакционные смеси выдерживают при t° 37°. Результат регистрируют в момент 100% гемолиза в контрольных пробах.

В диагностической практике используют активные, а также «непрямые» методы реакции связывания комплемента, являющиеся модификациями реакции Борде - Жангу. В первых из них показателем реакции служит изменение содержания комплемента в испытуемой сыворотке. Вторые основаны на том, что при некоторых заболеваниях сыворотки не содержат комплементсвязывающих антител, но способны предотвращать реакции с сыворотками, обладающими комплементсвязывающей активностью.

Наибольшая чувствительность и точность присуща количественной РСК, в которой регистрируют гемолиз в зоне частичного лизиса. Чувствительность данной модификации реакции Борде - Жангу обусловлена тем, что в средней зоне лизиса (20—80%) отношение количества комплемента к количеству лизируемых эритроцитов имеет линейный характер. В основе этой реакции лежит специальный метод титрования комплемента, количество которого выражается в 50% единицах (Сн50) и подсчитывается на основе уравнения Крога, представляющего ход гемолиза в зоне частичного лизиса.

Степень гемолиза устанавливается при помощи спектрофотометра или фотоэлектроколориметра.

Количественная РСК в свою очередь имеет ряд модификаций. В частности, микрометод обеспечивает большую точность определений при малом расходе ингредиентов.