Резус-фактор — это врожденное групповое свойство эритроцитов человека, обусловленное присутствием в них антигенов резус. Резус-фактор не зависит от признаков других групповых систем, передается по наследству и не меняется в течение всей жизни; обозначается символом Rh.
Резус-фактор находится в эритроцитах 85% людей, кровь которых называется резус-положительной (Rh+)- Около 15% людей не обладает резус-фактором, и кровь их называется резус-отрицательной (Rh—). Существует несколько различных антигенов (см.) системы резус, которые могут находиться в эритроцитах людей вместе или порознь. Нормальные естественные антитела к антигенам системы резус, как правило, не встречаются. Однако в результате иммунизации человека резус-фактором во время беременности или при многократных переливаниях резус-положительной крови резус-отрицательному реципиенту могут, образоваться иммунные антитела антирезус неполной или полной формы. При трансфузии (см. Переливание крови) резусположительной крови резус-отрицательному реципиенту, содержащему резус-антитела, наступает гемолиз (см.) эритроцитов донора, что влечет за собой трансфузионную реакцию или осложнение. Для профилактики подобных осложнений необходимо переливать резус-отрицательному реципиенту только резус-отрицательную кровь и перед переливанием производить пробу на совместимость не только по группам крови, но и по резус-фактору.
Методика определения резус-фактора в эритроцитах различна и зависит от формы антител, содержащихся в стандартной сыворотке. При неполных антителах наиболее часто применяется реакция агглютинации (конглютинации) в различных коллоидных средах (нативной сыворотке, желатине), реакция с протеолитическими ферментами и др.
Рис. 1. Определение резус-фактора в чашках Петри. Исследуемые эритроциты резус-положительные.
Для постановки реакции конглютинации в сывороточной среде, кроме исследуемых эритроцитов, необходимо иметь две серии стандартных сывороток антирезус и контрольные образцы резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. Реакция проводится на чашках Петри, куда наносятся в шесть точек по 2 капли стандартной сыворотки двух различных серий (3 точки одной и 3 точки другой серии). Затем в первые точки различных серий стандартной сыворотки добавляется по 1 капле 5—10% взвеси контрольных резус-положительных эритроцитов, во вторые точки — по 1 капле 5—10% взвеси контрольных резус-отрицательных эритроцитов, в третьи точки — такое же количество исследуемых эритроцитов. После смешивания (стеклянными палочками) сывороток в каждой точке с добавленными эритроцитами чашку помещают в водяную баню при t° 46—48° на 7—10 мин. О результатах судят по наличию или отсутствию агглютинации в каплях с исследуемыми эритроцитами(рис. 1),рассматривая их над источником света.
Рис. 2. Результаты реакции определения резус-фактора с применением желатины: 1 — наличие агглютинации; 2 — отсутствие агглютинации.
Реакция конглютинации с желатиной обычно проводится в пробирках емкостью 8—10 мл. В штатив устанавливают 2 ряда пробирок для двух различных серий стандартной сыворотки. В контрольные пробирки каждого ряда вводят по 1 капле стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов, в остальные пары пробирок — исследуемые эритроциты. Исследование можно проводить как с отмытыми, так и с неотмытыми эритроцитами. Затем в каждую пробирку добавляют по одной капле подогретой до разжижения желатины (10% раствор) и по одной капле стандартной сыворотки. Содержимое пробирок смешивают путем встряхивания и помещают в водяную баню при t° 46—48° на 5 мин., по истечении которых в каждую пробирку доливают 5—8 мл подогретого до t° 46—48° физиологического раствора NaCl и рассматривают на свет, определяя наличие или отсутствие агглютинации (рис. 2).
При исследовании сывороткой, содержащей полные антитела, применяют метод агглютинации в солевой среде в маленьких пробирках (высотой 2—2,5 см, диаметром 0,5 — 0,6 см). В штатив устанавливают 2 ряда пробирок (по количеству исследуемых образцов и по 2 для контроля), в которые вводится по 2 капли стандартной сыворотки и по 1 капле 2% взвеси эритроцитов, предварительно дважды отмытых физиологическим раствором NaCl. Содержимое пробирок встряхивают и помещают в термостат при t° 37° на 1 час.
О резус-принадлежности судят по форме осадка, который рассматривают через лупу с 5—7-кратным увеличением над источником света, закрытым матовым стеклом. Результаты при всех этих методах учитывают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации в исследуемых эритроцитах после проверки контрольных образцов.
Резус-фактор в акушерстве
Резус-конфликт во время беременности обычно развивается в тех случаях, когда плод у женщины с резус-отрицательной кровью наследует резус-фактор отца (плод Rh+). Эритроциты плода, содержащие резус-фактор, могут в незначительном количестве проникать через дефекты плаценты в кровь матери. В результате этого в организме матери образуются резус-антитела, которые, проходя через плаценту в кровь плода, вызывают у него развитие гемолиза. Во время первой беременности резус-конфликт обычно не приводит к развитию гемолитической болезни. При последующих беременностях резус-положительным плодом или при ошибочном переливании резус-положительной крови резус-отрицательной женщине количество антител в крови матери возрастает. Наиболее высокое содержание антител обычно наблюдается перед родами.
Во время беременности всем женщинам следует производить исследование на присутствие в крови резус-фактора, в случае отсутствия которого следует обследовать мужа беременной. Всех беременных женщин с резус-отрицательной кровью (муж с резус-положительной кровью) в женских консультациях берут на особый учет и периодически производят исследование их крови на резус-антитела. Для профилактики и терапии резус-конфликта показано проведение неспецифической десенсибилизирующей терапии (общее ультрафиолетовое облучение, витамины, хлористый кальций, викасол и пр.). Эти мероприятия не могут полностью предотвратить резус-конфликта, но несколько ослабляют его.
При возрастании титра резус-антител в крови показано досрочное родоразрешение. В последние годы предложен новый метод профилактики гемолитической болезни новорожденных, основанный на введении первородящим непосредственно после родов иммуноглобулина. Этот препарат содержит резус-антитела, которые блокируют резус-антигены и тем самым предотвращают выработку антител в организме женщины.
При рождении плода с признаками гемолитической болезни проводится комплекс лечебных мероприятий (см. Гемолитическая болезнь новорожденных.).
Резус-фактор — иммунологическое свойство крови людей, обусловленное наличием агглютиногенов, присутствующих в эритроцитах человека независимо от четырех групп крови. Ландштейнер и Винер (К. Landsteiner, A. Wiener) при иммунизации кроликов эритроцитами обезьян Macacus rhesus установили, что сыворотка кроликов приобрела способность агглютинировать эритроциты не только данных обезьян, но и большинства людей. Так было открыто существование в эритроцитах человека нового агглютиногена, получившего название резус-фактора (Rh).
Резус-фактор передается по наследству. При отсутствии у родителей резус-фактора его не может быть у детей. Наличие резус-агглютиногена выявляется уже у 3—4-месячного эмбриона и остается постоянным в течение всей жизни.
Представление о резус-факторе не может быть ограничено одним только агглютиногеном Rh. Последний тесно связан с другим агглютиногеном, обозначенным как Hr, и составляет с ним общую систему Rh — Hr, включающую три разновидности Rh-агглютиногена — Rh0, rh', rh" и три разновидности Hr -агглютиногена — hr0, hr', hr" (номенклатура Винера). Применяется также номенклатура Фишера — Рейса, в которой агглютиногены Rh обозначаются прописными буквами D, С, Е, а агглютиногены Hr — соответствующими строчными d, с, е (таблица 1).
Таблица 1
К системе агглютиногенов, составляющих резус-фактор, относятся также более редкие варианты агглютиногенов D, С и Е: Du, Cw, Сu, Сх, Eu, Ew, f и пр.
Все агглютиногены системы Rh — Hr являются антигенами: попадая в организм человека, они способны иммунизировать его, вызывая образование Rh-антител и Hr-антител различной активности, и реагировать с этими антителами. Наибольшее практическое значение имеют агглютиногены Rh0, rh', rh" и hr'.
Разновидности Rh- и Hr-агглютиногенов встречаются в эритроцитах по отдельности и в сочетаниях между собой; 8 вариантов этих сочетаний представлены в таблице 2.
Таблица 2
Агглютиноген hr содержится в эритроцитах примерно у 83% людей (hr-положительных) и отсутствует у остальных 17% (hr-отрицательных). В число hr-положительных входят все Rh-отрицательные. Людей, в крови которых нет никаких разновидностей резус-агглютиногенов, насчитывается 12,5—13%.
При попадании в организм человека любого отсутствующего у него агглютиногена вырабатываются соответствующие антитела: анти-Rho, анти-hr' и т. д. При введении двух антигенов могут выработаться два антитела: анти-Rh0rh', анти-Rh0rh" и др. Наибольшей антигенной активностью обладает агглютиноген Rh0.
Сыворотки, содержащие различные Rh-и hr-антитела, дают реакцию агглютинации с исследуемыми эритроцитами не одинаково часто, а именно: сыворотка анти-Rho—85%, анти-rh'—70%, анти-rh"— 32%, анти Rh0rh'—87%, aHTH-Rh0rh" — 85%, анти-hr— 80%.
Сыворотки, содержащие резус-антитела высокой активности, используются для определения резус-фактора в крови. Для получения сывороток в родильных домах берут кровь резус-отрицательных женщин, сенсибилизированных беременностями (см. ниже).
Для определения резус-фактора в эритроцитах желательно одновременно применять антирезус-сыворотки 2—3 серий. При смешении с исследуемыми эритроцитами сыворотки вызывают их агглютинацию (кровь резус-положительная) или агглютинация не наступает (кровь резус-отрицательная). Для установления разновидности агглютиногенов необходимо продолжить исследование монотиповыми сыворотками (анти-rh', анти-rh" и др.).
Чтобы получить точные результаты при определении резус-фактора, необходимо соблюдать тепловой режим (45—47°), применять постоянные количественные соотношения сыворотки и эритроцитов (2 : 1), правильно изготовить эмульсию эритроцитов и точно выдерживать время инкубации.
К числу наиболее распространенных относится конглютинирующая методика определения на чашках Петри и в пробирках с применением желатины.
Для конглютинирующей методики необходимы сыворотки антирезус не менее двух серий, одноименной с исследуемой кровью группы, и 5—8 мл исследуемой крови, взятой без стабилизатора. На чашку Потри наносят по 2 капли сыворотки антирезус разных серий. Затем ко всем сериям сывороток добавляют по 1 капле исследуемых эритроцитов в виде взвеси в собственной сыворотке. Капли размешивают стеклянной палочкой, и чашку помещают в водяную баню (45°) на 8—10 мин. При наличии агглютинации во всех каплях кровь следует считать резус-положительной, при отсутствии агглютинации всюду — резус-отрицательной. Контроль сывороток проводят стандартными Rh+ и rh— эритроцитами по той же технике.
Определение резус-фактора с применением желатины производят в. пробирках высотой 10 см, диаметром 10—12 мм. Необходимы сыворотки двух серий, 10% раствор подогретой до разжижения желатины и исследуемая кровь (2—3 мл), взятая без стабилизатора.
Берут два ряда пробирок по числу исследований, в каждую попарно вводят по 0,01 мл густой взвеси исследуемых эритроцитов, взятых без стабилизатора. Добавляют по 1 капле сыворотки первой и второй серии и по 1 капле желатины. Штатив встряхивают и помещают в водяную баню (t° 48°) на 3 мин., после чего в каждую пробирку доливают физиологический раствор почти до верха, пробирку два раза переворачивают и рассматривают на свет невооруженным глазом или с помощью лупы. При агглютинации видны крупные или мелкие хлопья на фоне просветленной жидкости (резус-положительная кровь). При отсутствии агглютинации жидкость в пробирке гомогенная, равномерно окрашенная (резус-отрицательная кровь). В этом случае также ставят контроль со стандартными Rh+ и rh— эритроцитами.
Несовместимость по резус-фактору при переливании крови даже в малых дозах может вызвать продукцию антител у реципиента. При повторных трансфузиях без учета резус-фактора у реципиента развивается внутрисосудистый гемолиз эритроцитов донора.
Особенностью резус-реакций является их медленное развитие и позднее проявление (через 1—2 часа после переливания). Как реакции, так и более тяжелые грозные осложнения выражаются той же клинической картиной, что и при трансфузии крови, несовместимой по группе (см. Переливание крови), и требуют тех же лечебных мероприятий. В тяжелых случаях необходимо немедленно выяснить причины возникшего осложнения и при установлении разноименной резус-принадлежности произвести заместительную трансфузию резус-отрицательной крови (кровопускание в объеме 600— 800 мл и введение несколько большего количества крови). В остальном — те же меры, что и при осложнениях от переливания крови, несовместимой по группе.
Профилактика может быть полностью обеспечена только при применении одноименной по резус-фактору крови. Перед каждой трансфузией необходимо производить пробу на совместимость по резус-фактору сыворотки больного и эритроцитов донора по обычной методике (см. Переливание крови), но при температуре 45°. Наличие агглютинации указывает на несовместимость.